Фармацевтическая композиция, промотирующая дефекацию

Фармацевтическая композиция, промотирующая дефекацию

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к новой фармацевтической композиции, промотирующей дефекацию, и к новому пиримидиновому соединению или его соли.

Уровень техники

Констипация относится к состояниям, когда дефекация затруднена или редкая, и это является хорошо известным заболеванием. Известные типы дефекации подразделяются, главным образом, на, например, функциональную констипацию (острая констипация и различные виды хронической констипации (например, атоническая констипация, спастическая констипация, дисхезия, ректальная констипация, химически вызванная констипация, и т.п.)), органическую констипацию, энтеропаралитический илеус, IBS (синдром раздражения толстой кишки), констипацию, сопровождающую IBS, констипацию, сопровождающую врожденную дисфункцию пищеварительного тракта, констипацию, сопровождающую илеус, и т.п. При дефекации в нормальном состоянии стимуляция ректальной слизистой оболочки содержимым кишечника, переносимым в прямую кишку, передается к центральному нерву, вызывая, таким образом, наклон для стула, причем в то же время вызываются рефлекторная релаксация и сокращение кишок и мышц (рефлекс дефекации), в то время как констипация происходит из-за разрушения функции дефекации автономной нервной дисфункцией, имеющей место в пищеварительном тракте, избыточного поглощения воды в кишечнике, уменьшения секреции кишечной слизи, препятствия для спонтанного движения, психосоматической болезни пищеварения в пищеварительных органах (например, синдрома раздраженной толстой кишки (IBS), ослабления рефлекторной функции дефекации и т.п.). Многие из таких препятствий вызываются привычками в питании, образом жизни, физической активностью, психогенным фоном (психическим стрессом, эмоциональной неустойчивостью и т.п.). В последнее время такая констипация является серьезной проблемой в области ухода за больными и клинического и медикаментозного лечения. Одним из факторов является тот факт, что в обществе в последнее время быстро возрастает число пожилых людей, и возрастает число пожилых людей, требующих ухода. Быстро возрастает число пациентов с констипацией (например, атонической констипацией), связываемой с автономной нервной дисфункцией. Другим фактором является повышение числа заболеваний, легко вызывающих снижение функции подвижности пищеварительного тракта. В частности, одним из серьезных заболеваний является диабет, проблемный в связи с осложнениями, вызывающими быстрое повышение числа пациентов с констипацией. Такое явление называют симптоматической констипацией, и оно также наблюдается при гипотиреоидизме, склеродермии, цереброваскулярных расстройствах, депрессии, спинальных расстройствах, электролитических отклонениях, уремии, интерстициальной болезни легких, эмфиземе легких и различных нервных болезнях. Кроме указанного, имеется много сообщений о пациентах со спастической констипацией, сопровождающей IBS, часто наблюдаемой у людей молодого возраста, о пациентах с химически вызванной констипацией, вызванной применением морфина у больных раком, и т.п.

В основных способах лечения обычно используют такие предписания, как слабительное средство и клизма. Однако такие химические средства после их введения легко вызывают диарею, причиняют физические и психические страдания пациентам и медицинским сестрам и обычно требуют длительного времени до проявления своего действия, и их действие является длительным. Также существует проблема, что чрезмерное использование клизмы также вызывает исчезновение наклона для стула. Кроме того, когда у пациента высокое кровяное давление или у него может быть кровоизлияние в мозг, церебральный инфаркт, инфаркт миокарда и т.п., также складывается ситуация, когда неизбежно должна использоваться клизма для предупреждения таких заболеваний. Соответственно, если имеется лекарственное средство, мягко промотирующее дефекацию, не вызывающее диареи, можно ожидать, что такое лекарственное средство окажется очень полезным и выгодным для многих пациентов и медицинских сестер и там, где существует потребность в обеспечении лечебным средством. Однако лечебного средства, уловлетворительного во всех указанных аспектах, пока не найдено.Что касается промотирующего дефекацию средства, не вызывающего диареи, то, с одной стороны, в WO 94/16702 и в Jpn. J. Pharmacol. (68, 119-123 (1995)) сообщается о "средстве для лечения аномальной дефекации, содержащем в качестве активного ингредиента производное ксантина, селективно и антагонистически ингибирующее рецептор аденозина А₁, или его фармакологически приемлемую соль".

Аденозин является важным регулирующим фактором, участвующим во многих внутриклеточных обменах, таких как регуляция уровней энергии и уровней сАМР в живом организме, открытие и закрытие кальциевых каналов и приток ионов кальция в клетки, и его взаимодействие с аденозиновыми рецепторами на поверхности клетки существенно для проявления таких физиологических активностей. До настоящего времени идентифицированы четыре вида подтипов рецепторов (А₁, А_2а, А_2b, А₃). Указанные подтипы отличаются один от другого по своему распределению в тканях; то есть, рецептор А₁ встречается в относительно большом количестве в сердце, аорте, мочевом пузыре и т.п., но почти не встречается в тощей кишке и в проксимальной ободочной кишке, рецептор А_2а встречается в относительно большом количестве в глазном яблоке, скелетных мышцах и т.п., рецептор А_2b - в проксимальной ободочной кишке, глазном яблоке, легких и т.п. и рецептор А₃ - в селезенке, матке, предстательной железе и т.п. (Br. J. Pharmacol., 118, 1461-1468 (1996)). Аденозин вовлекается в различные физиологические функции, такие как агглютинация тромбоцитов, сердечные сокращения, сокращение гладких мышц, воспаления, секреция нейротрансмиттеров, нейротрансмиссия, секреция гормонов, клеточная дифференцировка, рост клеток, гибель клеток, биосинтез ДНК и т.п., что наводит на мысль о его причастности к болезням центральной нервной системы, сердечно-сосудистым заболеваниям, воспалительным заболеваниям, респираторным заболеваниям, иммунным болезням и т.п., так что ожидается полезность агонистов/антагонистов аденозиновых рецепторов против таких болезней. Кроме цитированной выше WO 94/16702, имеются указанные далее сообщения 1)-5) о соотношении аденозиновых рецепторов и кишечного тракта.

1) Средство для лечения аномального ускорения подвижности кишечника, содержащее аденозиновое производное или его фармакологически приемлемую соль в качестве активного ингредиента (JP-A 6-211669).

2) Селективный антагонист аденозинового рецептора А₁ вызывает промотирующее дефекацию действие путем усиления подвижности кишечного тракта посредством высвобождения ацетилхолина в нервных окончаниях, распределенных в кишечном тракте (Eur. J. Pharmacol., 264, 91 (1994), Gastroenterology, 104, 1420 (1993), Neuroscience, 67, 159 (1995)).

3) Селективный антагонист аденозинового рецептора А₂ не вызывает действия, промотирующего дефекацию (Jpn. J. Pharmacol., 68, 119-123 (1995), Eur. J. Pharmacol., 64, 91 (1994)).4) Агонисты аденозина NECA и СРА добавляют в количестве 0,1-30 мкМ в продольный слой мышечной оболочки дистальной ободочной кишки крысы, сокращенный путем стимуляции карбахолом, и посредством этого наблюдают релаксацию, и такое действие при добавлении NECA проявляется сильнее, чем с СРА, и антагонизируется 1 мкМ DPCPX как антагониста аденозина. Величина рА2 (NECA - 6,15-6,66; СРА - 6,45-6,55) антагонистического действия DPCPX наводит на мысль, что релаксирующее действие опосредуется рецептором А₂, и такое действие не антагонизируется 10 мкМ CGS21680 (Naunyn-Schmieberg's Arch. Pharmacol., 359, 140-146 (1999)).

5) Путем добавления агониста аденозина А₁/А₂ NECA или агониста А₁ СРА в продольный слой мышечной оболочки дистальной ободочной кишки морской свинки, сокращенный элекростимуляцией, наблюдают релаксацию, в то время как действие агониста А_2а CGS21680 очень слабое. Кроме того, релаксирующее действие NECA антагонизируется DPCPX как антагонистом А₁ и 8-РТ как антагонистом А₁/А₂, и величина рА2 антагонистического действия указанных двух веществ и их соотношение (DPCPX - 8,8; 8-РТ - 6,5) привело к мысли, что такое релаксирующее действие опосредуется рецептором А₁. Кроме того, NECA или СРА в концентрации, достаточной для релаксации сокращения продольного слоя мышечной оболочки дистальной ободочной кишки морской свинки, сокращенного элекростимуляцией (100 нМ), не обнаруживают релаксирующего действия на сокращение мышц, стимулированное ацетилхолином. На основании вышеизложенного предполагается, что рецептор А₁, через который опосредуется релаксирующее действие аденозина на сокращение продольного слоя мышечной оболочки дистальной ободочной кишки морской свинки, стимулированное элекростимуляцией, встречается в пресинапсе в нервных окончаниях и участвует в подавлении секреции ацетилхолина. NECA обнаружил релаксирующее действие (ЕС₅₀; 10,4 мкМ) на сокращение продольного слоя мышечной оболочки дистальной ободочной кишки морской свинки, стимулированное KCl, в присутствии тетродотоксина, в то время как 1 мкМ CGS21680 на него не действует, а СРА воздействует на такое сокращение при высокой концентрации (ЕС₅₀; 12,6 мкМ). Кроме того, DPCPX в концентрации, достаточной для селективного ингибирования рецептора А₁ (1 нМ), не показывает антагонистического действия, причем таким образом указывается, что такое релаксирующее действие не передается через рецептор А₁. Кроме того, DPCPX в концентрации, достаточной для ингибирования рецептора А_2b (10 нМ), ингибирует релаксирующее действие NECA и СРА, и сравнение величин рА2 (NECA - 6,6; СРА - 7,0) в каждом случае (6,6) и в случае DPCX, имеющем величину рА2 (5,7), при ингибировании действия NECA 10 мкМ 8-РТ, показало, что такое ингибирующее действие передается через рецептор А_2b. Такие результаты показали, что релаксирующее действие аденозина на сокращение продольного слоя мышечной оболочки дистальной ободочной кишки морской свинки, стимулированное KCl, в присутствии тетродотоксина передается через рецептор А_2b, присутствующий в продольном слое мышечной оболочки. На основании результатов таких экспериментов сделано предположение, что аденозин проявляет релаксирующее действие через два разных рецептора, т.е. рецептор А₁ в пресинапсе и рецептор А_2b в постсинапсе в продольном слое мышечной оболочки дистальной ободочной кишки морской свинки (Br. J. Pharmacol., 129, 871-876 (2000)).

Сообщается, что производное ксантина, не вызывающее диареи, описанное в WO 94/16702, цит. выше, проявляет промотирующее дефекацию действие, основанное на антагонизме в отношении аденозинового рецептора А₁, через холинергические нервы (Eur. J. Pharmacol., 264, 91 (1994)). Соответственно, считается клинически важным, если сильное промотирующее дефекацию действие может проявиться через непосредственное действие на пищеварительный тракт. Однако производное ксантина обнаруживает диуретическое действие, основанное на антагонизме с аденозиновым рецептором А₁ (JP-A 3-173889), так что его применение в качестве средства, промотирующего дефекацию, должно существенно ограничиваться. Вследствие допущения его применения пациентами с осложнениями при болезнях почек или пожилыми людьми, требующими ухода, желательно, чтобы баланс между диуретическим действием и промотирующим дефекацию действием сдвигался в сторону действия, промотирующего дефекацию. На основании вышеизложенного можно ожидать, что при лечении констипации фармацевтические препараты, мягко, но эффективно промотирующие дефекацию, не вызывая диареи, будут очень полезны для пациентов и медицинских сестер. Таким образом, целью настоящего изобретения является исследование и создание таких лечебных средств.

Описание изобретения

Авторы настоящего изобретения провели интенсивные исследования с учетом обстоятельств, описанных выше, и на основании литературных данных об аденозиновых рецепторах в кишечном тракте человека и крысы, где сообщается, что рецептор А_2b, принадлежащий к подтипу рецептора А₂, особенно часто встречается в ободочной кишке (Mol. Endocrinol., 6, 384 (1992), Mol. Pharmacol., 47, 1126 (1995), Br, J. Pharmacol., 118, 1461 (1996)), установили описанные далее новые концепции (I) и (II).

(I) Различие в распределении аденозиновых рецепторов в ободочной кишке связано с функциями ободочной кишки. Иными словами, рецептор А₂, в частности, рецептор А_2b, тесно связан с регуляцией функций ободочной кишки.

(II) Поскольку подвижность ободочной кишки участвует в дефекации, соединение, обладающее антагонизмом к аденозиновому рецептору А₂, в частности, соединение, обладающее антагонизмом к аденозиновому рецептору А_2b, вызывает действие регуляции подвижности ободочной кишки через механизм, отличающийся от механизма действия вышеуказанного производного ксантина (антагониста А₁).

Затем авторы настоящего изобретения провели дополнительные масштабные исследования, и в результате нашли, что соединение, обладающее антагонизмом к рецептору А₂, в частности, соединение, обладающее антагонизмом к рецептору А_2b, проявляет мягкое, но сильное промотирующее дефекацию действие, не вызывая диареи, и таким образом осуществили данное изобретение.

Таким образом, настоящее изобретение относится к (1) промотирующему дефекацию средству, содержащему соединение, обладающее антагонизмом к аденозиновому рецептору А₂, или его соль, (2) промотирующему дефекацию средству, содержащему соединение, обладающее антагонизмом к аденозиновому рецептору А_2b, или его соль, (3) промотирующему дефекацию средству согласно приведенным выше разделам (1) и (2), которое используют для лечения, предупреждения или облегчения симптома, когда дефекация затруднена и/или редкая, (4) промотирующему дефекацию средству согласно приведенным выше разделам (1) и (2), являющемуся средством для лечения, предупреждения или облегчения констипации, (5) промотирующему дефекацию средству согласно приведенным выше разделам (1) и (2), являющемуся средством для лечения, предупреждения или облегчения функциональной констипации, (6) промотирующему дефекацию средству согласно приведенному выше разделу (5), где функциональная констипация представляет собой спастическую констипацию или атоническую констипацию, (7) промотирующему дефекацию средству согласно приведенным выше разделам (1) и (2), являющемуся средством для лечения, предупреждения или облегчения синдрома раздраженной толстой кишки или констипации, сопровождающей синдром раздраженной толстой кишки, (8) промотирующему дефекацию средству согласно приведенным выше разделам (1) и (2), являющемуся средством для лечения, предупреждения или облегчения органической констипации, констипации, сопровождающей энтеропаралитический илеус, констипации, сопровождающей врожденную дисфункцию пищеварительного тракта, или констипации, сопровождающей илеус, (9) промотирующему дефекацию средству согласно приведенным выше разделам (1) и (2) для опорожнения кишечника во время проверки пищеварительного тракта или перед и после операции, (10) промотирующему дефекацию средству согласно приведенным выше разделам (1) и (2), где соединение является по меньшей мере одним соединением, выбранным из 2-амино-4-(2-фурил)-5-(4-пиридил)пиримидина, 3-н-пропилксантина, теофиллина, кофеина, 1,3-дипропилксантина, энпрофиллина, 1-метил-3-изобутилксантина, параксантина, 8-фенилтеофиллина, 1,3-диэтил-8-фенилксантина, 8-[4-[[[[(2-аминоэтил)амино]карбонил]метил]окси]фенил]-1,3-дипропилксантина, 8-[4-[[[метил-(2-диметиламиноэтил)амино]сульфонил]фенил]-1,3-дипропилксантина, 1,3-диметил-8-(п-сульфофенил)ксантина и 1,3-дипропил-8-(п-сульфофенил)ксантина, (11) применению соединения, обладающего антагонизмом к аденозиновому рецептору А₂, или его соли для получения промотирующего дефекацию средства, (12) применению соединения, обладающего антагонизмом к аденозиновому рецептору А_2b, или его соли для получения промотирующего дефекацию средства, (13) применению антагониста рецептора А_2b для получения средства для лечения, предупреждения или облегчения констипации, (14) соединению, представленному формулой

(где А представляет фенильную группу, пиридильную группу, тиенильную группу или фурильную группу, которая может быть замещена одной или двумя группами, выбранными из атома галогена, гидроксильной группы, С_1-6-алкильной группы, С_1-6-алкоксигруппы и С_1-6-алкоксикарбонильной группы;

В представляет пиридильную группу, которая может быть замещена одной или несколькими группами, выбранными из атома галогена, гидроксильной группы, С_1-6-алкильной группы и аминогруппы;

R¹ представляет атом водорода, морфолинильную группу или группу, представленную формулой -NR^1aR^1b (где R^1a и R^1b являются одинаковыми или различными, и каждый представляет атом водорода, С_1-6-алкильную группу, С_1-6-ацильную группу, фенильную группу или С_1-6-алкилсульфонильную группу); и

R² представляет атом водорода или группу, представленную формулой -NR^2aR^2b (где R^2a и R^2b являются одинаковыми или отличаются друг от друга, и каждый представляет атом водорода или С_1-6-алкильную группу),

при условии, что в приведенном выше определении случаи, когда (i) А представляет собой 4-фторфенильную группу; В представляет собой 4-пиридильную группу; R¹ представляет собой аминогруппу и R² представляет собой атом водорода, и (ii) А представляет собой 4-фторфенильную группу; В представляет собой 4-пиридильную группу; R¹ представляет собой ацетамидную группу и R² представляет собой атом водорода, исключаются), или к его соли,

(15) соединению, представленному формулой

(где А, R¹ и R² имеют значения, указанные выше в (14); и B' представляет собой 1,2-дигидро-2-пиридинон-4-ильную группу, которая может быть замещена одной или несколькими группами, выбранными из атома галогена, гидроксильной группы, С_1-6-алкильной группы и аминогруппы), или к его соли, (16) фармацевтической композиции, содержащей соединение, описанное выше в разделах (14) или (15), или его соль, (17) композиции согласно вышеописанному разделу (16), являющейся антагонистом аденозинового рецептора А_2b, (18) композиции согласно вышеописанному разделу (16), являющейся промотирующим дефекацию средством, (19) композиции согласно вышеописанному разделу (16), являющейся средством для лечения, предупреждения или облегчения констипации, (20) композиции согласно вышеописанному разделу (16), являющейся средством для лечения, предупреждения или облегчения функциональной констипации, (21) композиции согласно вышеописанному разделу (20), где функциональная констипация представляет собой спастическую констипацию или атоническую констипацию, (22) композиции согласно вышеописанному разделу (16), являющейся средством для лечения, предупреждения или облегчения синдрома воспаленной толстой кишки или констипации, сопровождающей синдром раздраженной толстой кишки, (23) композиции согласно вышеописанному разделу (16), являющейся средством для лечения, предупреждения или облегчения органической констипации, констипации, сопровождающей энтеропаралитический илеус, констипации, сопровождающей врожденную дисфункцию пищеварительного тракта, или констипации, сопровождающей илеус, и (24) композиции согласно вышеописанному разделу (16) для опорожнения кишечного тракта во время проверки пищеварительного тракта или перед и после операции.

Настоящее изобретение относится к способу промотирования дефекации путем введения пациенту фармакологически эффективного количества соединения, обладающего антагонизмом к аденозиновому рецептору А₂, или его соли, способу промотирования дефекации путем введения пациенту фармакологически эффективного количества соединения, обладающего антагонизмом к аденозиновому рецептору А_2b, или его соли, и к способу лечения, предупреждения или облегчения констипации путем введения пациенту фармакологически эффективного количества соединения, обладающего антагонизмом к аденозиновому рецептору А_2b, или его соли.

Настоящее изобретение относится к применению соединения, представленного формулами (I) или (II), или его соли для получения промотирующего дефекацию средства и к применению соединения, представленного формулами (I) или (II), или его соли для получения средства для лечения, предупреждения или облегчения констипации.

Настоящее изобретение относится к способу промотирования дефекации путем введения пациенту фармакологически эффективного количества соединения, представленного формулами (I) или (II), или его соли, и к способу лечения, предупреждения или облегчения констипации путем введения пациенту фармакологически эффективного количества соединения, представленного формулами (I) или (II), или его соли.

Далее описываются значения символов, терминов и т.п., используемых в настоящем описании, и подробнее описывается настоящее изобретение.

В данном описании термин "промотирующее дефекацию средство" относится к фармацевтической композиции, промотирующей физиологическую дефекацию.

В данном описании термин "констипация" относится к состояниям, когда дефекация ощущается как затруднительная или является редкой, и включает различные виды констипации, такие как функциональная констипация, органическая констипация, энтеропаралитический илеус, IBS, констипация, сопровождающая IBS, констипация, сопровождающая врожденную дисфункцию пищеварительного тракта, и констипация, сопровождающая илеус. Кроме того, термин "констипация" также включает состояния с некоторыми страданиями и затруднениями даже при небольшой дефекации. В данном описании к функциональной констипации относятся острая констипация и различные виды хронической констипации (например, атоническая констипация, спастическая констипация, дисхезия, ректальная констипация, химически вызванная констипация и т.п.).

В данном описании термин "соединение" относится как к непептидному соединению, так и к пептидному соединению. "Соединение" может образовывать соль или может образовывать ангидрид или гидрат.

В данном описании "соль" не имеет особых ограничений, пока она представляет собой фармакологически приемлемую соль соединения, обладающего антагонизмом в отношении рецептора А₂, или соединения, обладающего антагонизмом в отношении рецептора А_2b, и предпочтительными примерами такой соли являются 1) соли галогеноводородных кислот (например, гидрофторид, гидрохлорид, гидробромид и гидроиодид); 2) соли неорганических кислот (например, сульфат, нитрат, перхлорат, фосфат, карбонат и бикарбонат); 3) соли органических карбоновых кислот (например, ацетат, оксалат, малеат, тартрат и фумарат); 4) соли органических сульфоновых кислот (например, метансульфонат, трифторметансульфонат, этансульфонат, бензолсульфонат, толуолсульфонат и камфорсульфонат); 5) соли аминокислот (например, аспартат и глутамат); 6) соли четвертичных аминов; 7) соли щелочных металлов (например, натриевая соль и калиевая соль) и 8) соли щелочноземельных металлов (например, магниевая соль и кальциевая соль).

В данном описании термин "антагонизм" относится к действию инактивации путем блокирования взаимодействия аденозинового рецептора с его лигандом (аденозином), т.е. путем блокирования связывания лиганда с рецептором. Термин "соединение, обладающее антагонизмом" относится к соединению, проявляющему действие инактивации путем блокирования связывания лиганда (аденозина) с аденозиновым рецептором.

Далее описываются примеры испытаний, демонстрирующие, что фармацевтическая композиция по настоящему изобретению полезна в качестве фармацевтической композиции, промотирующей дефекацию (далее называемой "промотирующим дефекацию средством") (примеры испытаний 1-3). Соединения, используемые при испытаниях, являются соединениями, обозначенными и представленными формулами, приведенными далее.

Соединение I: 2-амино-4-(2-фурил)-5-(4-пиридил)пиримидин

Соединение I является новым антагонистом рецептора А_2b (пример № 3), найденным авторами изобретения. С одной стороны, KF20274 и KW3902 известны как селективные антагонисты рецептора А₂, в то время как KW6002 известен как селективный антагонист рецептора А_2а. Способность указанных соединений связываться с подтипом аденозиновых рецепторов и их ингибирующая активность показаны ниже (табл.6). KF20274 получают способом, описанным в J. Med. Chem., Vol.35, No.19, 3578-3581 (1992), KW3902 - способом, описанным в J. Med. Chem., Vol.35, No.5, 924-930 (1992), и KW6002 - способом, описанным в Bioorg. & Med. Chem. Lett., Vol.7, No.18, 2349-2352 (1997).

Пример испытаний 1. Ингибирующее действие антагониста аденозинового рецептора А_2b на подавляющее действие NECA на сокращение ободочной кишки, стимулированное карбахолом

(1) Иссечение ободочной кишки

Вскрывают живот крысы под наркозом эфиром и из него иссекают участок от прямой кишки до слепой кишки и погружают в охлажденный на льду раствор Тирода (содержащий 136 мМ NaCl, 2,7 мМ KCl, 0,4 мМ NaH₂PO₄.2H₂O, 5,6 мМ глюкозы, 11,9 мМ NaHCO₃, 1 мМ MgCl₂.6H₂O, 1,8 мМ CaCl₂). Окружающую соединительную ткань удаляют и кишечный тракт разрезают в положениях на расстоянии 1,5 см от прямой кишки и на 3 см от слепой кишки, и получают ободочный участок тракта общей длиной примерно 3 см. Оба конца ободочной кишки зажимают, соответственно, Serrefines (торговое наименование), к которым присоединена нить, и ободочную кишку со стороны слепой кишки, обращенную назад, сразу же суспендируют в трубке Магнуса, наполненной раствором Тирода, предварительно нагретым до 37^оС, и затем уравновешивют, барботируя газ (О₂/СО₂ = 95/5). Нить, присоединенную к Serrefines (торговое наименование) со стороны слепой кишки, суспендируют и определяют изменение длины ободочной кишки с помощью усилителя сжатия при напряжении (Nihon Kohden Corporation).

(2) Сокращение ободочной кишки с помощью карбахола

Карбахол (Sigma), разбавленный при каждой концентрации в 100 раз, кумулятивно добавляют в трубку Магнуса в объеме 1/100 и измеряют изменение длины ободочной кишки, и ее длину в отсутствие карбахола рассматривают как сокращение 0%, а ее длину в присутствии 1,44 мкМ карбахола рассматривают как сокращение 100%. В эксперименте используют 3 образца.

(3) Ингибирующее действие NECA на стимулированное карбахолом сокращение ободочной кишки

К ободочной кишке в трубке Магнуса в присутствии 1,44 мкМ кумулятивно добавляют разбавленный в 100 раз NECA (Sigma) в объеме 1/100 и измеряют изменение длины ободочной кишки. Предполагая, что ее длина в отсутствие карбахола принимается за сокращение в 0%, в то время как ее длина в присутствии 1,44 мкМ карбахола принимается за сокращение в 100%, определяют ее сокращение в присутствии NECA. В эксперименте используют 3 образца.

(4) Ингибирующее действие агониста аденозиновых рецепторов на подавляющее действие NECA на стимулированное карбахолом сокращение ободочной кишки

К ободочной кишке в трубке Магнуса последовательно добавляют 0,3 мкМ карбахола и 1 мкМ NECA и добавляют кумулятивно соединение I, KF20274 или KW6002, разбавленные в 100 раз, в объеме 1/100, и измеряют изменение длины ободочной кишки. Предполагая, что ее длина в присутствии 0,3 мкМ карбахола и 1 мкМ NECA принимается за сокращение в 0%, в то время как ее длина в присутствии только 0,3 мкМ карбахола принимается за сокращение в 100%, определяют сокращение в присутствии каждого из антагонистов аденозиновых рецепторов. В эксперименте используют 3 образца.

При стимуляции карбахолом (вышеописанная операция 2) ободочная кишка показывает сокращение, зависящее от концентрации карбахола (табл.1). Когда к ней добавляют агонист аденозинового рецептора NECA (вышеописанная операция 3), наблюдают его ингибирующее действие на сокращение, зависящее от концентрации NECA (табл.2). Карбахол оказывает стимулирующее мускариновые и ацетилхолиновые рецепторы действие в вегетативных ганглиях и гладких мышцах соответственно, так что ингибирующее действие NECA в отношении сокращения нельзя объяснить только за счет его действия, осуществляемого через нервы, распределенные в гладких мышцах, причем таким образом предполагается возможность его прямого действия на гладкие мышцы. Кроме того, когда к такой системе добавляют каждый антагонист для аденозинового рецептора (вышеописанная операция 4), соединение I ингибирует подавляющее действие NECA на сокращение в зависимости от концентрации соединения I (табл.3). С одной стороны, селективный в отношении А₁ антагонист KF20724 и селективный в отношении А_2а антагонист KW6002 не показывают какого-либо ингибирующего действия. Это указывает на то, что подавляющее сокращение действие NECA не является действием, опосредуемым рецепторами А₁ и А_2а, причем таким образом предполагается участие рецептора А_2b. В результате предполагается, что аденозин может подавлять сокращение ободочной кишки непосредственно через рецептор А_2b в гладких мышцах ободочной кишки, и авторы настоящего изобретения достигли цели в непосредственной демонстрации того, что антагонист рецептора А_2b может антагонизировать промотирование сокращения ободочной кишки.

Таблица 1
Карбахол (мкМ)	Сокращение (%)
Среднее	Среднеквадратическая ошибка
0,01	1,4	1,4
0,04	24,5	10,4
0,14	69,1	5,5
0,44	87,0	2,4
1,44	100,0	0,0

Таблица 2
NECA (мкМ)	Сокращение (%)
Среднее	Среднеквадратическая ошибка
0,1	89,0	3,2
0,4	75,3	4,9
1,4	63,1	6,8
4,4	59,2	4,6
14,4	54,9	8,9

Карбахол 1,44 мкМ (однократное добавление) = 100%

Таблица 3
Соединение I(мкМ)	Сокращение (%)
Среднее	Среднеквадратическая ошибка
0,1	71,5	36,2
0,4	111,0	51,9
1,4	122,0	53,1
4,4	85,9	35,6

Карбахол, 0,3 мкМ + NECA, 1 мкМ = 0%

Карбахол 0,3 мкМ (однократное добавление) = 100%

KW20274 (мкМ)	Сокращение (%)
Среднее	Среднеквадратическая ошибка
0,1	-8,2	4,8
0,4	-26,0	20,7
1,4	-40,0	24,2
4,4	-71,0	35,7

KW6002 (мкМ)	Сокращение (%)
Среднее	Среднеквадратическая ошибка
0,1	5,2	3,4
0,4	1,1	4,2
1,4	-2,9	3,3
4,4	-3,9	7,8

Пример испытаний 2. Промотирующее дефекацию действие на крыс антагониста аденозинового рецептора А_2b

Авторы настоящего изобретения проверили и сравнили действие антагониста аденозинового рецептора А_2b (соединение I), селективного антагониста А₁ или селективного антагониста А_2а на дефекацию у крыс.

Крыс SD IGS (в возрасте 6 недель, от Charles River) помещают в клетки (3 животных на клетку) и предварительно позволяют кормиться и пить воду ad libitum и выращивают в течение 1 недели. В день эксперимента измеряют их массу, на дно каждой клетки помещают поглощающий воду лист, и животных не кормят, но оставляют доступ к воде ad libitum в течение всего эксперимента. Через три часа после прекращения доступа к корму из каждой клетки извлекают фекальные шарики и обследуют на аномалии перед экспериментом, и затем каждой крысе вводят перорально соединение, суспендированное или растворенное в 0,5% (мас./об.) растворе метилцеллюлозы (МС), в дозе 5 мл/кг. С другой стороны, контрольной группе дают перорально только 0,5% (мас./об.) МС. После введения соединения крыс возвращают в клетку, где положен новый поглощающий воду лист известной массы, и через 180 минут после введения из каждой клетки извлекают фекальные шарики с поглощающего воду листа, и проводят обследование внешнего вида, и подсчитывают число фекальных шариков. Приводят число фекальных шариков на каждую клетку (табл.4). После извлечения фекальных шариков взвешивают поглощающий воду лист, и массу, полученную путем вычитания исходной массы поглощающего воду листа из массы после эксперимента, принимают за объем урины и выражают в виде объема урины на 100 г массы тела (табл.4).

Таблица 4
Соединение	Доза	Число фекальных шариков/3 крысы	Объем урины (г/100 г массы тела)
Контроль	-	1,00±0,68	0,89±0,10
Соединение I	3 мг/кг10 мг/кг	16,33±1,8230,00±2,79	0,79±0,091,23±0,13
KW3902	0,3 мг/кг1 мг/кг3 мг/кг	10,67±2,0814,50±1,1812,83±1,66	2,08±0,042,15±0,092,01±0,06
KW6002	1 мг/кг3 мг/кг	6,67±1,637,00±0,86	0,72±0,070,76±0,05

Как видно из табл.4, селективный в отношении рецептора А₁ антагонист KW3902 обнаруживает промотирующее дефекацию действие, но такое действие, как можно видеть, достигает максимума при дозе 1 мг/кг. Также селективный в отношении рецептора А_2а антагонист KW6002 оказывает слабое промотирующее дефекацию действие. С одной стороны, антагонист рецептора А_2b соединение I не вызывает диареи и показывает явно более сильное промотирующее дефекацию действие, чем селективный в отношении рецептора А₁ антагонист KW3902 или селективный в отношении рецептора А_2а антагонист KW6002. Соединение I является соединением, также оказывающим антагонистическое ингибирующее действие на рецептор А₁, но такое сильное промотирующее дефекацию действие нельзя объяснить на основе поглощения или различной дозы соединения, обладающего антагонистическим ингибирующим действием на рецептор А₁. Это так, поскольку хорошо известно, что соединения, обладающие антагонистическим ингибирующим действием на рецептор А₁, обладают диуретическим действием (J. Pharmacol. Exp. Ther., 266, 200 (1993)), но селективный в отношении рецептора А₁ антагонист KW3902 обладает более сильным диуретическим действием, чем соединение I, в то время как его промотирующее дефекацию действие слабее, чем у соединения I. С другой стороны, соединение I обладает более слабым диуретическим действием, чем селективный в отношении рецептора А₁ антагонист KW3902, в то время как его промотирующее дефекацию действие сильнее.

Иными словами, табл.4 показывает, что действие соединения I нельзя объяснить только антагонистическим действием на рецептор А₁, и что более сильное промотирующее дефекацию действие вызывается добавлением антагонистического ингибирующего действия на рецептор А_2b.

Пример испытаний 3. Вклад ингибирования аденозинового рецептора А_2b в промотирующее дефекацию действие

С целью дополнительной проверки вклада антагонистического ингибирующего действия соединения I в отношении рецептора А_2b в его сильное промотирующее дефекацию действие вводят сочетание селективного в отношении рецептора А₁ антагониста KW3902 и селективного в отношении рецептора А_2а антагониста KW6002 и сравнивают с соединением I. Испытываемых крыс выращивают и получают соединения так же, как при испытании 1. После введения соединений крыс возвращают в клетку, на дно которой помещен новый поглощающий воду лист, и через 180 минут из каждой клетки извлекают фекальные шарики с поглощающего воду листа, и отмечают внешний вид и подсчитывают число фекальных шариков. Число фекальных шариков выражают в расчете на клетку (табл.5).

Таблица 5
Соединение	Доза	KW6002(1 мг/кг)	Число фекальных шариков на 3 крысы
Контроль	-	-	2,50±0,65
Соединение I	3 мг/кг	-	34,00±1,00
KW3902	0 мг/кг1 мг/кг1 мг/кг	+-+	7,00±1,589,00±1,0818,25±1,49

В примере испытаний 3 селективный в отношении рецептора А₁ антагонист KW3902 вводят в дозе, достаточной для проявления диуретического действия. Как видно из табл.5, когда селективный в отношении рецептора А₁ антагонист KW3902 и селективный в отношении рецептора А_2а антагонист KW6002 вводят одновременно, сказываются относительные промотирующие дефекацию действия обоих антагонистов. Соответственно, считается, что соединение, обладающее как антагонистическим действием в отношении рецепто