Индолилмалеимидные производные, способ их получения, их применение и фармацевтическая композиция для лечения или профилактики нарушений или заболеваний, опосредованных т-лимфоцитами и/или пкс

Индолилмалеимидные производные, способ их получения, их применение и фармацевтическая композиция для лечения или профилактики нарушений или заболеваний, опосредованных т-лимфоцитами и/или пкс

Реферат

Настоящее изобретение относится к индолилмалеимидным производным, способу их получения и содержащим их фармацевтическим композициям.

В частности, в настоящем изобретении представлено соединение формулы I

в которой

R_a обозначает Н, СН₃, СН₂-СН₃ или изопропил,

R_b обозначает Н, галоген, С_1-6алкокосигруппу или С_1-6алкил и либо

I. R представляет собой радикал формулы (а)

в которой

R₁ обозначает пиперазин-1-ил, необязательно замещенный СН₃ в положении 3 или 4, или 4,7-диаза-спиро[2,5]окт-7-ил,

R₂ обозначает Cl, Br, CF₃ или СН₃, и

R₃ обозначает Н, СН₃ или CF₃; R₂ отлично от СН₃ или Cl, когда R₃ обозначает Н,

R_a обозначает Н или СН₃, R_b обозначает Н, и R₁ обозначает 4-метил-1-пиперазинил; либо

II. R_a обозначает радикал формулы (б)

в которой

R₄ обозначает 1-пиперазинил, замещенный СН₃ в положениях 3 и/или 4, или

4,7-диаза-спиро[2,5]окт-7-ил, R_a отлично от Н или СН₃, когда R₄ обозначает 4-метил-1-пиперазинил; либо

III. R обозначает остаток формулы (в)

в которой

R₁₄ обозначает 1-пиперазинил, необязательно замещенный СН₃ в положении 3 и/или 4 или в положении 3 этилом, фенил-С_1-4-алкилом, С_1-4алкокси-С_1-4алкилом или галоген-С_1-4алкилом; или 4,7-диаза-спиро[2,5]окт-7-ил,

R₁₅ обозначает галоген, CF₃ или СН₃, R₁₅ отлично от СН₃, когда R₁₆ обозначает СН₃, R_a обозначает Н или СН₃, R_b обозначает Н, и R₁₄ обозначает 4-метил-1-пиперазинил, и

R₁₆ обозначает Н, СН₃, СН₂-СН₃ или CF₃, R₁₆ отлично от Н, когда R₁₅

обозначает Cl, R_a обозначает Н или СН₃, R_b обозначает Н, и R₁₄ обозначает 4-метил-1-пиперазинил, либо

IV. R представляет собой радикал формулы (г)

в которой R₈ обозначает 1-пиперазинил, 3-метил-пиперазин-1-ил или 4-бензил-пиперазин-1-ил, либо

V. R представляет собой радикал формулы (д)

в которой R₉ обозначает 4,7-диаза-спиро[2,5]окт-7-ил или пиперазин-1-ил, замещенный в положении 3 метилом или этилом и необязательно метилом в положении 4.

Соединения формулы I могут существовать в свободной форме или в форме солей, например аддитивных солей, образованных, например, с органическими или неорганическими кислотами, например хлористо-водородной кислотой, уксусной кислотой, трифторуксусной кислотой.

Следует принять во внимание, что соединения формулы I могут существовать в форме оптических изомеров, рацематов или диастереомеров. Например, атом углерода цикла, несущий заместитель в положении 3 остатка пиперазинила, является асимметричным и может иметь R- или S-конфигурации. Следует иметь в виду, что настоящее изобретение охватывает все энантиомеры и их смеси. Энантиомеры являются более предпочтительными, чем рацематы. Как отмечено выше, аналогичные соображения относятся к исходным материалам, имеющим асимметричные атомы углерода. Алкил или алкоксигруппа могут быть неразветвленными или разветвленными. Фенил-С_1-4алкил предпочтительно представляет собой бензил или фенетил. В С_1-4алкокси-С_1-4алкиле часть алкоксигруппы предпочтительно представляет собой метокси- или этоксигруппу, и алкильная часть предпочтительно представляет собой метил или этил, подходящим примером является, например, 2-метоксиэтил. Галоген может представлять собой F, Cl, Br или I, предпочтительно F, Cl или Br. Галоген-С_1-4алкил представляет собой алкил, в котором один или более атомов Н замещены галогеном, например Cl или F, например CH₂Cl, CH₂F или CF₃.

R предпочтительно обозначает радикал формулы (а), (в) или (г), предпочтительно (д).

В радикале формулы (а) или (в), R₂ или R₁₅ предпочтительно находятся в пара-положении относительно R₁ или R₁₄ соответственно. R₃ находится предпочтительно в мета-положении относительно R₁. В радикале или формуле (г) R₉ предпочтительно обозначает 4,7-диаза-спиро[2,5]окт-7-ил; когда R₉ представляет собой пиперазинил, замещенный в положении 3, он имеет R- или S-конфигурацию.

Настоящее изобретение включает также способ получения соединения формулы I, который включает реакцию соединения формулы II

в котором R_a и R_b такие, как определено выше, с соединением формулы III

в котором R такое, как определено выше,

и, если требуется, превращение конечного соединения формулы I, полученного в свободной форме, в солевую форму или наоборот, по необходимости.

Способ можно подходящим образом осуществить в присутствии сильного основания, например трет-BuOK, например, как описано в Международной заявке WO 02/38561, содержание которой включено в данном контексте в виде ссылки, и как показано в Примерах.

Соединения формул II и III могут быть получены в соответствии с известными способами, например, как описано в Международной заявке WO 02/38561, содержание которой включено в данном контексте в виде ссылки, и как показано в Примерах.

В том случае, если получение исходных продуктов подробно не описано, соединения являются известными или могут быть получены аналогично методам, известным в области техники или как описано далее.

Следующие примеры иллюстрируют изобретение без каких-либо ограничений.

КТ = комнатная температура

ТГФ = тетрагидрофуран

УКХ = ускоренная колоночная хроматография

ФТБ = фторид тетрабутиламмония

BINAP = 2,2'-бис(дифенилфосфин)-1,1'-бинафтил

Pd₂(dba)₃ = Pd(0)-бис(дибензилиденацетон)

Пример 1: 3-[2-Хлор-3-метил-5-(4-метил-пиперазин-1-ил)-фенил]-4-(1Н-индол-3-ил)-пиррол-2,5-дион

2-[2-Хлор-3-метил-5-(4-метил-пиперазин-1-ил)-фенил]-ацетамид (211 мг, 0,75 ммоль) и 3-индолглиоксилат (270 мг, 1,35 ммоль) растворяют в ТГФ (5 мл). Добавляют раствор 1,0 М трет-BuOK в ТГФ (2,98 мл, 4 экв.) и перемешивают смесь при температуре 35°С в течение ночи. Реакцию разводят AcOEt (20 мл) и промывают Н₂О (20 мл) и соляным раствором (10 мл). Органическую фазу сушат над Na₂SO₄ и выпаривают растворитель. Остаток очищают с помощью УКХ (AcOEt/AcOH/H₂O 7:1:1), что дает титульное соединение в форме соли уксусной кислоты. Данные ¹H ЯМР-спектроскопии (ДМСО, 400 МГц) δ 2,16 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 2,32-2,38 (m, 4Н), 2,97-3,10 (m, 4H), 6,61 (d, J=8,0 Гц, 1Н), 6,71-6,77 (m, 2Н), 7,04 (d, J=2,8 Гц, 1Н), 7,08 (dd, J=7,4, 7,2 Гц, 1H), 7,41 (d, J=8,2 Гц, 1Н), 7,98 (d, J=1,5 Гц, 1H), 11,05 (br s, 1H), 11,90 (br s, 1H); ES-MS: 435 [M+H]⁺.

2-[2-Хлор-3-метил-5-(4-метил-пиперазин-1-ил)-фенил]-ацетамид,

используемый как исходный материал, может быть получен следующим образом:

метиловый эфир (5-бром-2-хлор-3-метил-фенил)-уксусной кислоты (2,0 г, 7,2 ммоль), N-метилпиперазин (960 мкл, 8,6 ммоль) и Cs₂СО₃ (3,3 г, 10,1 ммоль) суспендируют в толуоле (80 мл). Добавляют Pd(OAc)₂ (81 мг, 0,36 ммоль) и BINAP (224 мг, 0,36 ммоль) и перемешивают реакцию при температуре 100°С в течение ночи. Смесь фильтруют через целит и выпаривают растворитель. Остаток очищают с помощью УКХ (AcOEt/AcOH/H₂O 60:15:15), что дает метиловый эфир 2-[2-хлор-3-метил-5-(4-метил-пиперазин-1-ил)-фенил]-уксусной кислоты. Данный эфир суспендируют в 25% NH₄OH (60 мл). Смесь перемешивают в течение ночи при КТ, и отфильтровывают осадок, получая амид. Данные ¹H ЯМР-спектрометрии (ДМСО, 400 МГц) δ 2,20 (s, 3Н), 2,27 (s, 3Н), 2,40-2,45 (m, 4Н), 3,07-3,13 (m, 4H), 3,48 (s, 2Н), 6,78 (s, 1H), 6,82 (s, 1H), 6,91 (brs, 1H), 7,34 (br s, 1H).

CuCl₂ (8,0 г, 0,06 моль) и трет-бутилнитрил (8,9 мл, 0,074 моль) суспендируют в ацетонитриле (60 мл). 1,1-дихлорэтилен добавляют по каплям при температуре 20°С. Добавляют 5-бром-2-хлор-3-метил-фениламин (11,0 г, 0,05 моль), растворенный в ацетонитриле (60 мл), и перемешивают реакцию при КТ в течение 3 ч. Смесь выливают в водную 20% HCl (150 мл) и экстрагируют водную фазу с использованием CH₂Cl₂ (2×150 мл). Органическую фазу сушат над Na₂SO₄ и выпаривают растворитель. Остаток очищают с помощью УКХ (гексан/СН₂Cl₂ 9:1), что дает 5-бром-2-хлор-1-метил-3-(2,2,2-трихлор-этил)-бензол. Промежуточный продукт перерастворяют в МеОН (80 мл) и нагревают до температуры 70°С. Раствор 5,4 M NaOMe в МеОН (28,4 мл) добавляют по каплям и перемешивают реакцию при температуре 70°С в течение 3 ч. Реакцию охлаждают до КТ и добавляют концентрированную H₂SO₄ (10 мл). Реакцию перемешивают при нагревании с обратным холодильником в течение 1 ч. Смесь разводят H₂O (200 мл) и экстрагируют СН₂Cl₂ (2×200 мл). Объединенные органические фазы сушат над Na₂SO₄ и выпаривают растворитель. Остаток очищают помощью УКХ (гексан/СН₂Cl₂ 9:1-1:1), что приводит к получению метилового эфира (5-бром-2-хлор-3-метил-фенил)-уксусной кислоты. Данные ¹Н ЯМР-спектрометрии (CDCl₃, 400 МГц) δ 2,26 (s, 3Н), 3,61 (s, 3Н), 3,63 (s, 2Н), 7,15 (s, 1H), 7,21 (s, 1H).

Согласно процедуре, представленной в Примере 1, но при использовании соответствующих исходных материалов можно получить соединения формулы I, в которых R представляет собой остаток формулы (а), как указано в Таблице 1 ниже.

Таблица 1
Пример	R1	R2	R3	Ra	Rb	Данные масс-спектрометрии
2	-(4-метил-пиперазин-1-ил)	2-СНз	3-СН3	СН3	Н	МН+ 429
3	-(4-метил-пиперазин-1-ил)	2-СН3	3-СН3	Н	Н	MH+ 415
4	-(4-метил-пиперазин-1-ил)	2-Cl	3-СН3	СН3	Н	МН+ 421
5	1-пиперазинил	2-Cl	3-СН3	Н	Н	MH+ 435
6	1-пиперазинил	2-Cl	3-СН3	СН3	Н	MH+ 435
7	3-R-метил-пиперазин-1-ил	2-Cl	3-СН3	СН3	Н	MH+ 449
8	3-R-метил-пиперазин-1-ил	2-Cl	3-СН3	Н	Н	МН+ 435
9	1-пиперазинил	2-Cl	3-CH3	СН3	Н	МН+ 503
10	1-пиперазинил	2-Cl	3-CH2	Н	Н	MH+ 489
11	-(4-метил-пиперазин-1-ил)	2-Cl	3-СН3	Н	СН(СН3)2	MH+ 477
12	-(4-метил-пиперазин-1-ил)	2-Cl	3-СН3	Н	СН3	MH+ 449
13	-(4-метил-пиперазин-1-ил)	2-Cl	3-СН3	Н	СН2-СН3	МН+ 463
14	-(4-метил-пиперазин-1-ил)	2-Cl	3-СН3	Н	Cl	MH+ 469
15	-(4-метил-пиперазин-1-ил)	2-Cl	3-СН3	Н	F	MH+ 453

Пример	R1	R2	R3	Ra	Rb	Данные масс-спектрометрии
16	-(4,7-диаза-спиро[2.5]окт-7-ил)	2-Cl	Н	Н	СН2-СН3	MH+ 462
17	-(4,7-диаза-спиро[2.5]окт-7-ил)	2-Cl	Н	Н	Cl	MH+468
18	-(4,7-диаза-спиро [2.5]окт-7-ил)	2-Cl	Н	Н	СН3	MH+ 447
19	-(4,7-диаза-спиро[2.5]окт-7-ил)	2-Cl	Н	Н	Н	MR+ 434

Пример 20: 3-[3-(4,7-Диаза-спиро[2.5]окт-7-ил)-нафталин-1-ил]-4-(1-метил-1Н-индол-3-ил)-пиррол-2,5-дион

Из 2-[3-(4,7-Диаза-спиро[2.5]окт-7-ил)-нафталин-1-ил]-ацетамида (100 мг, 0,30 ммоль) и метилового эфира (1-метил-1Н-индол-3-ил)-оксо-уксусной кислоты (97 мг, 0,44 ммоль) трижды получают азеотропную смесь с сухим ТГФ, а затем растворяют в сухом ТГФ (3 мл). Раствор 1,0 М KOtBu в ТГФ (1,2 мл) добавляют по каплям в течение 20 мин при КТ. Через 5 минут анализ с помощью ТСХ (тонкослойной хроматографии) показывает полное превращение исходных материалов. Реакцию гасят добавлением воды (5 мл). Смесь разводят EtOAc и дважды промывают насыщенным водным раствором NH₄Cl Водные слои дважды подвергают обратной экстракции EtOAc. Объединенные органические слои сушат над Na₂SO₄ и выпаривают растворитель. Остаток очищают с помощью УКХ (EtOAc/АсОН/Н₂О 800:55:45), что приводит к получению титульного соединения в виде его соли ацетата. Соединение растворяют в МеОН/ТФК (трифторуксусная кислота) и удаляют растворитель, получая титульное соединение в виде его соли трифторацетата. Данные ¹H ЯМР-спектрометрии (ДМСО, 400 МГц) δ 0,95 (М, 4Н), 3,39 (br, 4H), 3,49 (br, 2H), 3,86 (s, 3Н), 6,16 (d, J=7,9 Гц, 1Н), 6,46 (dd, J=6,6/7,9 Гц, 1Н), 7,00 (dd, J=6,6/7,9 Гц, 1Н), 7,13 (dd, J=7,6/7,6 Гц, 1H), 7,40 (m, 4Н), 7,55 (d, J=8,5 Гц, 1H), 7,78 (d, J=7,6 Гц, 1H), 8,14 (s, 1H), 9,10 (br, 2H), 11,17 (s, 1H); ES-MS: 463 [M+H]⁺.

2-[3-(4,7-Диаза-спиро[2.5]окт-7-ил)-нафталин-1-ил]-ацетамид, используемый как исходный материал, может быть получен следующим образом:

а) Из 2-[3-(4-бензил-4,7-диаза-спиро[2.5]окт-7-ил)-нафталин-1-ил]-ацетамида (280 мг, 0.73 ммоль) дважды получают азеотропную смесь с 1,25 М раствором HCl в МеОН. Остаток растворяют в EtOH (10 мл). Добавляют палладий на угле (10%, 77 мг) и перемешивают смесь в атмосфере водорода (1 атм) при КТ в течение 14 ч и при температуре 50°С в течение 2 ч. Смесь фильтруют и концентрируют фильтрат. Остаток очищают с помощью УКХ (EtOAc/АсОН/Н₂О 750:83:68-600:150:150), получая титульное соединение, содержащее 0,7 экв. АсОН. Данные ¹Н ЯМР-спектрометрии (ДМСО, 400 МГц) δ 0,53 (m, 4H), 1,78 (s, АсОН), 2,93 (ddd, 2H), 3,04 (s, 2H), 3,16 (ddd, 2H), 3,76 (s, 2H), 6,94 (br, 1H), 6,99 (s, 1H), 7,25 (dd, 1H), 7,26 (s, 1H), 7,35 (dd, J=6,7/7,8, 1H), 7,49 (br, 1H), 7,69 (d, J=7,8, 1H), 7,88 (d, J=10,0, 1H); ES-MS: 296 [M+H]⁺.

б) 2-[3-(4-бензил-4,7-диаза-спиро[2.5]окт-7-ил)-нафталин-1-ил]-ацетамид

Этиловый эфир [3-(4-бензил-4,7-диаза-спиро[2.5]окт-7-ил)-нафталин-1-ил]-уксусной кислоты (347 мг, 0,84 ммоль) и формамид (126 мг, 2,80 ммоль) растворяют в атмосфере аргона в ДМФ (диметилформамиде) (1 мл). Раствор нагревают до температуры 105°С и по каплям добавляют NaOMe (155 мкл 5,4 M раствора в МеОН, 45 мг, 0,84 ммоль) в течение 15 мин. Через 30 мин выдерживания при температуре 105°С, анализ с помощью ТСХ показывает, что исходный материал полностью использован. Реакционную смесь охлаждают до КТ, разводят водой и экстрагируют EtOAc. Слои EtOAc дважды промывают водой. При удалении растворителя и очистке с помощью УКХ (EtOAc/MeOH 98:2 до 96:4 до 90:10) получают титульное соединение. Данные ¹Н ЯМР-спектрометрии (CDCl₃, 400 МГц) δ 0,71 (ddd, 2H), 0,89 (ddd, 2H), 3,10 (ddd, 2H), 3,16 (s, 2H), 3,31 (ddd, 2H), 3,93 (s, 2H), 3,99 (s, 2H), 5,33 (br, 1H), 5,42 (br, 1H), 7,11 (s, 1H), 7,23 (d, J=2,0, 1H), 7,32 (m, 5H), 7,37 (dd, J=6,7 Гц, 1H), 7,45 (dd, J=6,7 Гц, 1H), 7,73 (d, J=8,9 Гц, 1H), 7,85 (d, J=8,9 Гц, 1H); ES-MS: 386 [М+Н]⁺.

в) Этиловый эфир [3-(4-Бензил-4,7-диаза-спиро[2.5]окт-7-ил)-нафталин-1-ил]-уксусной кислоты

Этиловый эфир (3-трифторметансульфонилокси-нафталин-1-ил)-уксусной кислоты (500 мг, 1,38 ммоль) растворяют в атмосфере аргона в сухом ТГФ (10 мл). Добавляют 4-бензил-4,7-диаза-спиро[2.5]октан (325 мг, 1,61 ммоль) с последующим добавлением К₃PO₄ (410 мг, 1,93 ммоль), Pd₂(dba)₃ (62 мг, 0,069 ммоль) и бифенил-2-ил-ди-трет-бутил-фосфана (21 мг, 0,069 ммоль). Реакционную смесь нагревают до температуры 80°С. Через 4 ч анализ с помощью ТСХ показывает, что исходный материал полностью использован. Реакционную смесь охлаждают до КТ, фильтруют и концентрируют. Остаток очищают УКХ (гексаны/EtOAc 100:0 до 90:10, до 80:20, до 70:30, до 0:100), что дает титульное соединение. Данные ¹Н ЯМР-спектрометрии (CDCl₃, 400 МГц) δ 0,69 (ddd, 2Н), 0,86 (ddd, 2H), 1,24 (t, J=7,0 Гц, 3Н), 3,09 (ddd, 2Н), 3,19 (s, 2H), 3,31 (ddd, 2H), 3,93 (s, 2H), 4,02 (s, 2H), 4,17 (q, J=7,0 Гц, 2H), 7,08 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,33 (m, 6H), 7,42 (dd, J=8,8 Гц, 1H), 7,71 (d, J=8,8 Гц, 1H), 7,88 (d, J=8,8 Гц, 1H); ES-MS: 415 [M+H]⁺.

г) Этиловый эфир (3-трифторметансульфонилокси-нафталин-1-ил)-уксусной кислоты

Этиловый эфир (3-гидрокси-нафталин-1-ил)-уксусной кислоты (1,67 г, 7,25 ммоль) растворяют в CH₂Cl₂ (20 мл) в атмосфере аргона. Добавляют пиридин (1,17 мл, 1,15 г, 14,50 ммоль) и охлаждают реакционную смесь до 0°С, после чего по каплям добавляют трифторметансульфоновый ангидрид (1,79 мл, 3,07 г, 10,88 ммоль). Реакционную смесь нагревают до КТ, и через 1 ч выдерживания при КТ анализ с помощью ТСХ показывает, что исходный материал полностью использован. Реакционную смесь разводят EtOAc и дважды промывают Н₂О. Объединенные органические слои сушат над Na₂SO₄, растворитель удаляют и остаток очищают с помощью УКХ (гексаны/EtOAc 100:0 до 97:3, до 95:5, до 93:7, до 90:10), что приводит к получению титульного соединения. Данные ¹Н ЯМР-спектрометрии (ДМСО, 400 МГц) δ 1,19 (t, J=7,2 Гц, 3Н), 4,11 (q, J=7,2 Гц, 2Н), 4,38 (s, 2Н), 7,60 (d, J=3,0 Гц, 1H), 7,70 (m, 2H), 8,03 (m, 1H), 8,12 (m, 2H); ES-MS: 362 [M+H]⁺.

д) Этиловый эфир (3-гидрокси-нафталин-1-ил)-уксусной кислоты

Этиловый эфир (3-бензилокси-нафталин-1-ил)-уксусной кислоты (2,43 г, 7,58 ммоль) растворяют в МеОН (50 мл). Добавляют палладий на угле (807 мг) и перемешивают реакционную смесь при КТ в атмосфере водорода (1 атм) в течение 14 ч. Реакционную смесь фильтруют. При концентрировании получают чистое титульное соединение. Данные ¹Н ЯМР-спектрометрии (CDCl₃, 400 МГц) δ 1,18 (t, J=7,2 Гц, 3Н), 4,05 (s, 2H), 4,10 (q, J=7,2 Гц, 2H), 7,04 (d, J=1,8 Гц, 1H), 7,06 (d, J=1,8, 1H), 7,30 (t, J=7,8, 1H), 7,40 (t, J=7,8, 1H), 7,70 (d, J=7,8, 1H), 7,80 (d, J=7,8 Гц, 1H); ES-MS: 230 [М+Н]⁺.

е) Этиловый эфир (3-бензилокси-нафталин-1-ил)-уксусной кислоты

3-бензилокси-1-бром-нафталин (5,64 г, 18,01 ммоль) растворяют в атмосфере аргона в сухом ДМФ (диметилформамиде) (100 мл). Добавляют этиловый эфир трибутилстаннанил-уксусной кислоты (7,47 г, 19,81 ммоль), а также дихлорид [бис(три-орто-толил-фосфин)]палладия (II) (2,83 г, 3,60 ммоль) и бромид цинка (II) (5,27 г, 23,41 ммоль). Реакционную смесь нагревают до температуры 80°С в течение 3 ч. Реакционную смесь разводят EtOAc и дважды промывают разбавленным соляным раствором (обратная экстракция). Объединенные органические слои сушат над Na₂SO₄, растворитель удаляют и остаток очищают с помощью УКХ (гексан/EtOAc 100:0 до 97,5:2,5, до 95:5, до 90:10). Полученное в результате масло, еще содержащее примеси олова, перемешивают в смеси 1:1 EtOAc/1 н. NaOH (200 мл) в течение 1 час. Смесь дважды экстрагируют EtOAc. Объединенные органические слои дважды промывают Н₂О (обратная экстракция), сушат над Na₂SO₄ и концентрируют. Остаток очищают с помощью УКХ (гексан/EtOAc 100:0 до 97:3, до 95:5, до 93:7, до 92:8, до 90:10), получая титульное соединение. Данные ¹Н ЯМР-спектрометрии (ДМСО, 400 МГц) δ 1,18 (t, J=7,2 Гц, 3Н), 4,10 (q, J=7,2 Гц, 2H), 4,11 (s, 2H), 5,25 (s, 2H), 7,21 (d, J=3,0 Гц, 1H), 7,41 (m, 8H), 7,53 (d, J=6,6 Гц, 1H), 7,84 (dd, J=7,2 Гц, 1H); ES-MS: 320 [М+Н]⁺.

ж) 3-Бензилокси-1-бром-нафталин

4-бром-нафталин-2-ол (5,0 г, 22,41 ммоль) растворяют в сухом ДМФ (50 мл) в атмосфере аргона. Добавляют гидрид натрия (986 мг 60% суспензии с минеральном масле, 592 мг, 24,65 ммоль) и смесь перемешивают при температуре 50°С в течение 1 ч. После вторичного охлаждения до КТ добавляют бензилбромид (3,46 мл, 4,98 г, 29,14 ммоль) и йодид тетрабутиламмония (828 мг, 2,24 ммоль). После выдерживания в течение 16 ч при КТ реакционную смесь разводят EtOAc. Раствор дважды промывают полуконцентрированным соляным раствором (обратная экстракция).

Объединенные органические слои сушат над Na₂SO₄, удаляют растворитель и очищают остаток с помощью УКХ (гексан/EtOAc 100:0 до 95:5, до 90:10), получая титульное соединение. Данные ¹Н ЯМР-спектрометрии (CDCl₃, 400 МГц) δ 5,22 (s, 2H), 7,25 (d, J=1,5 Гц, 1Н), 7,45 (m, 7Н), 7,64 (d, J=2,4, 1H), 7,75 (d, J=7,8, 1H), 8,17 (d, J=7,8, 1H); ES-MS: 312 [M+H]⁺.

Согласно процедуре, соответствующей Примеру 20, могут быть получены соединения формулы I, в которой R представляет собой остаток формулы (б), как показано в Таблице 2.

Таблица 2
Пример	R4	Ra	Данные M.S.*
21	3-R-метил-пиперазин-1-ил	СН3	MH+ 452
22	-(4,7-диаза-спиро[2.5]окт-7-ил)	СН3	МН+ 464
23	-(4,7-диаза-спиро[2.5]окт-7-ил)	Н	МН+ 450
24	3-R-метил-пиперазин-1-ил	Н	МН+ 438
25	3-S-метил-пиперазин-1-ил	СН3	MH+ 452
26	3-S-метил-пиперазин-1-ил	Н	МП+ 438
27	4-метил-3-S-метил-пиперазин-1-ил	СН3	МН+ 466
28	4-метил-3-S-метил-пиперазин-1-ил	Н	MH+ 452
* M.S. - масс-спектрометрия

Согласно процедуре, как описано выше или в Примере 56 Международной заявки WO 02/38561, но при использовании соответствующих исходных материалов могут быть получены соединения формулы I, в которой R представляет собой остаток формулы (с), как показано ниже в Таблице 3.

Таблица 3
Прим.	R14	R15 в 4	R16 в 5	Ra	Rb	Данные M.S.
29	-(4-метил-пиперазин-1-ил)	Cl	СН3	Н	Н	МН+ 437
30	-(4-метил-пиперазин-1-ил)	Br	Н	Н	Н	МН+ 469
31	-(4-метил-пиперазин-1-ил)	Br	СН3	Н	Н	МН+ 483
32	-(4-метил-пиперазин-1-ил)	Br	Н	СН3	Н	MH+ 483
33	-(4-метил-пиперазин-1-ил)	CF3	Н	Н	Н	MH+ 457
34	-(4-метил-пиперазин-1-ил)	CF3	Н	СН3	Н	MH+ 471
35	3-R-метил-пиперазин-1-ил	Cl	СН3	Н	Н	МН+ 437
36	-(4,7-диаза-спиро[2.5]окт-7-ил)	Cl	СН3	Н	Н	МН+ 449
37	1-пиперазинил	Cl	СН3	Н	Н	MH+ 423
38	4-метил-3-R-метил-пиперазин-ил	Cl	СН3	Н	Н	MH+ 451
39	3-R-метоксиэтил-пиперазин-1-ил	Cl	СН3	Н	Н	MH+ 481
40	3-R-этил-пиперазин-1-ил	Cl	СН3	Н	Н	MH+ 451
41	3-R-бензил-пиперазин-1-ил	Cl	СН3	Н	Н	MH+ 514
42	3-S-метил-пиперазин-1-ил	Cl	СН3	Н	Н	МН+ 437
43	4-метил-пиперазин-1-ил	Cl	СН3	Н	СН2-СН2-СН3	МН+ 479
44	3-СН2F-пиперазин-1-ил	Cl	СН3	Н	Н	МН+ 453
45	4-метил-пиперазин-1-ил	Cl	СН3	Н	F	МН+ 455
46	4-метил-пиперазин-1-ил	Cl	СН3	Н	СН(СН3)2	МН+ 479
47	4-метил-пиперазин-1-ил	Cl	СН3	Н	Cl	MH+ 471
48	4-метил-пиперазин-1-ил	Cl	СН3	Н	ОСН3	МН+ 467
49	4-метил-пиперазин-1-ил	Cl	СН3	Н	СН3	MH+ 451
50	4-метил-пиперазин-1-ил	Cl	СН3	Н	СН2-СН3	МН+ 465
51	4-метил-пиперазин-1-ил	CF3	Н	Н	СН2-СН3	МН+ 485
52	4-метил-пиперазин-1-ил	CF3	Н	Н	СН3	МН+ 471
53	4-метил-пиперазин-1-ил	F	Н	Н	Н	МН+ 407
54	4-метил-пиперазин-1-ил	F	Н	Н	СН3	MH+ 421
55	4-метил-пиперазин-1-ил	F	Н	Н	СН2-СН3	МН+ 435
56	4-метил-пиперазин-1-ил	F	СН2-СН3	Н	СН3	МН+ 449
57	4-метил-пиперазин-1-ил	F	СН2-СН3	Н	Н	МН+ 435
58	4-метил-пиперазин-1-ил	F	СН2-СН3	Н	СН2-СН3	МН+ 463
59	4-метил-пиперазин-1-ил	F	СН3	Н	Н	MH+ 421
60	4-метил-пиперазин-1-ил	F	СН3	Н	СН3	МН+ 435

Прим.	R14	R15 в 4	R16 в 5	Ra	Rb	Данные M.S.
61	4-метил-пиперазин-1-ил	F	СН3	H	СН2СН3	MH+ 449

Согласно процедуре, как описано выше или в примере 163 Международной заявки WO 02/38561, но при использовании соответствующих исходных материалов могут быть получены соединения формулы I, в которой R представляет собой остаток формулы (г), как показано в таблице 4.

Таблица 4
Пример	R8	Ra	Данные M.S.
62	3-S-метил-пиперазин-1-ил	СН3	МН+ 452
63	3-R-метил-пиперазин-1-ил	Н	MH+ 438
64	3-R-метил-пиперазин-1-ил	СН3	МН+ 452
65	4-бензил-1-пиперазинил	Н	МН+ 514
66	4-бензил-1-пиперазинил	СН3	МН+ 528
67	1-пиперазинил	СН3	MH+ 438
68	1-пиперазинил	Н	МН+ 424

Пример 69: 3-[3-(4,7-Диаза-спиро[2.5]окт-7-ил)-изохинолин-1-ил]-4-(7-метил-1Н-индол-3-ил)-пиррол-2,5-дион

Из 2-[3-(4,7-диаза-спиро[2.5]окт-7-ил)-изохинолин-1-ил]-ацетамида (4,95 г, 16,70 ммоль) и метилового эфира (7-метил-1Н-индол-3-ил)-оксо-уксусной кислоты (5,44 г, 25,05 ммоль) дважды получают азеотропную смесь с сухим ТГФ. Затем добавляют сухой ТГФ (100 мл) и в атмосфере аргона по каплям вводят KOtBu (1,0 М в ТГФ, 50 мл, 50 ммоль) в течение 20 мин. Через дополнительные 90 мин анализ с помощью ТСХ показывает полное превращение исходных материалов. Реакционную смесь разводят водой и дважды экстрагируют EtOAc. Объединенные органические слои дважды промывают насыщенным водным раствором NH₄Cl (обратная экстракция), сушат над Na₂SO₄ и концентрируют. Очистка с помощью УКХ (CH₂Cl₂/MeOH 100:0 до 98:2, до 96:4, до 94:6, до 92:8, до 90:10) дает титульное соединение, которое превращают в его соль уксусной кислоты путем концентрирования раствора EtOH/АсОН. Данные ¹H ЯМР-спектрометрии (ДМСО, 400 МГц) δ 0,26-0,53 (br, 4Н), 1,89 (s, 3H, СН₃СООН), 2,36 (s, 3H), 2,80 (br m, 2Н), 3,15 - 3,48 (br m, 2H), 6,14 (d, J=8,2 Гц, 1Н), 6,44 (dd, J=8,2/7,4 Гц, 1Н), 6,75 (d, J=7,4 Гц, 1Н), 7,00 (s, 1H), 7,02 (dd, J=8,2/8,2 Гц, 1Н), 7,40 (dd, J=8,2/8,2 Гц, 1Н), 7,59 (d, J=8,2 Гц, 1H), 7,63 (d, J=8,2 Гц, 1H), 7,63 (d, J=8,2 Гц, 1H), 7,97 (d, J=2,9 Гц, 1H), 11,04-11,21 (br, 1H), 11,86 (d, J=2,9 Гц, 1H); ES-MS: 464 [M+H]⁺.

2-[3-(4,7-Диаза-спиро[2.5]окт-7-ил)-изохинолин-1-ил]-ацетамид, используемый в качестве исходного материала, может быть приготовлен следующим образом:

а) 2-[3-(4-Бензил-4,7-диаза-спиро[2.5]окт-7-ил)-изохинолин-1-ил]-ацетамид (490 мг, 1,27 ммоль) растворяют в абсолютном МеОН (5 мл). Добавляют Pd на угле (140 мг), а также формиат аммония (200 мг, 3,17 ммоль). После нагревания с обратным холодильником в течение 1 ч (Т=75°С) добавляют дополнительную порцию формиата аммония (200 мг, 3,17 ммоль). Через 1 ч анализ с помощью ТСХ показывает полное превращение исходных материалов. После фильтрации и концентрирования остаток помещают в CH₂Cl₂ и промывают водой (рН 10 получают при добавлении 2 н. NaOH). Органический слой сушат над Na₂SO₄ и удаляют растворитель. Очистка с помощью УКХ (EtOAc/АсОН/Н₂О 750:83:68 до 700:110:90, до 650:130:120, до 600:150:150) приводит к получению титульного соединения в виде его бисацетатной соли. Данные ¹Н ЯМР-спектрометрии (ДМСО, 400 МГц) δ 0,46-0,52 (m, 4H), 2,88 (t, J=5,5, 2H), 3,35 (s, 2H), 3,49 (t, J=5,5, 2H), 3,94 (s, 2H), 6,77 (s, 1H), 7,00 (br s, 1H), 7,18-7,25 (m, 1H), 7,45-7,56 (m, 2H), 7,60-7,65 (m, 1H), 7,95 (d, J=9,9, 1H), ES-MS: 297 [М+Н]⁺.

б) 2-[3-(4-Бензил-4,7-диаза-спиро[2.5]окт-7-ил)-изохинолин-1-ил]-ацетамид

Этиловый эфир [3-(4-бензил-4,7-диаза-спиро[2.5]окт-7-ил)-изохинолин-1-ил]-уксусной кислоты (700 мг, 1,68 ммоль) растворяют в сухом ДМФ в атмосфере аргона. Добавляют формамид (224 мкл, 254 мг, 5,64 ммоль) и нагревают реакционную смесь до температуры 105°С. При данной температуре по каплям добавляют NaOMe (312 мкг 5,4 М раствора в МеОН, 91 мг, 1,68 ммоль) в течение 20 мин. После выдерживания в течение 30 мин при температуре 105°С анализ с помощью ТСХ показывает полное превращение исходного материала. После охлаждения реакционной смеси до КТ добавляют воду и проводят экстракцию с использованием EtOAc. Органические слои промывают Н₂О (два раза), сушат над Na₂SO₄ и концентрируют. Остаток очищают с помощью УКХ (гексан/EtOAc 1:1 до 1:3, до 0:100 до EtOAc/МеОН 98:2) для получения титульного соединения. Данные ¹Н ЯМР-спектрометрии (ДМСО, 400 МГц) δ 0,68-0,70 (m, 2Н), 0,82-0,88 (m, 2Н), 3,08 (t, J=4,4, 2H), 3,45 (s, 2H), 3,58 (t, J=4,4, 2H), 3,96 (s, 2H), 4,27 (s, 2H), 5,3 - 5,5 (br, 1H), 6,55-6,7 (br, 1H), 6,72 (s, 1H), 7,26-7,36 (m, 6H), 7,51 (t, J=8,8, 1H), 7,60 (d, J=9,9, 1H), 8,02 (d, J=9,9, 1H); ES-MS: 387 [М+Н]⁺.

в) Этиловый эфир [3-(4-бензил-4,7-диаза-спиро[2.5]окт-7-ил)-изохинолин-1-ил]-уксусной кислоты

Этиловый эфир (3-хлор-изохинолин-1-ил)-уксусной кислоты (2,50 г, 10,01 ммоль), 4-бензил-4,7-диаза-спиро[2.5]октан (2,23 г, 11,01 ммоль), NaOtBu (1,06 г, 11,01 ммоль), BINAP (249 мг, 0,40 ммоль) и ацетат палладия(II) (180 мг, 0,80 ммоль) смешивают под аргоном. После добавления дегазированного сухого диоксана (36 мл) суспензию нагревают до температуры 85°С. После выдерживания в течение 25 мин при температуре 85°С анализ ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография) показывает превращение на 71%. Смесь охлаждают до КТ, разводят EtOAc и промывают Н₂О и насыщенным водным раствором NH₄Cl (обратная экстракция). Объединенные органические слои сушат над Na₂SO₄, растворитель удаляют и остаток очищают с помощью УКХ (гексан/EtOAc 100:0 до 96:4, до 93:7, до 90:10, до 85:15) для получения титульного соединения. Данные ¹Н ЯМР-спектрометрии (ДМСО, 400 МГц) δ 0,58-0,61 (m, 2H), 0,70-0,73 (m, 2H), 1,18 (t, J=8,8, 3Н), 2,98 (t, J=5,5, 2H), 3,39 (s, 2H), 3,49 (t, J=5,5, 2H), 3,86 (s, 2H), 4,12 (s, 2H), 4,12 (q, J=8,8, 2H), 5,59 (s, 1H), 7,14-7,19 (m, 6H), 7,39 (t, J=8,8, 1H), 7,51 (d, J=9,9, 1H), 7,78 (d, J=9,9, 1H); ES-MS: 417 [M+H]⁺.

г) Этиловый эфир (3-хлор-изохинолин-1-ил)-уксусной кислоты

1,1,1,3,3,3-гексаметил-дисилазан (27,4 мл, 20,37 г, 126,2 ммоль) растворяют в сухом толуоле (150 мл). После охлаждения до температуры -78°С медленно добавляют н-BuLi (79 мл 1,6 М раствора в гексанах, 126,2 ммоль) в течение 20 мин. Суспензию белого цвета перемешивают при температуре -78°С в течение 15 мин и при КТ в течение 15 мин, через указанный период времени получают прозрачный раствор светло-желтого цвета. Данный раствор канюлей переносят во вторую двугорлую колбу, содержащую Pd₂(dba)₃ (1,39 г, 1,51 ммоль) и (2'-дициклогексилфосфанил-бифенил-2-ил)-диметил-амин (1,25 г, 3,18 ммоль). После перемешивания при КТ в течение 10 мин прозрачный раствор темно-красного цвета охлаждают до температуры -10°С. Трет-бутиловый эфир уксусной кислоты (15,7 мл, 13,5 г, 116,1 ммоль) добавляют в течение 5 мин. После выдерживания в течение 10 мин при температуре -10°С добавляют 1,3-дихлор-изохинолин (10,0 г, 50,49 ммоль) в одной порции. Раствору темно-красного цвета дают нагреться до КТ. Через 30 мин выдерживания при КТ анализ с помощью ТСХ показывает полное превращение исходного материала. Реакционную смесь фильтруют через слой оксида кремния толщиной 2 см, который промывают EtOAc/MeOH 98:2. После концентрирования остаток очищают с помощью УКХ (толуол/CH₂Cl₂ 2:1 до толуол/EtOAc 100:0 до 99:1, до 98:2, до 97:3, до 96:4, до 94:6, до 90:10) для получения трет-бутилового эфира (3-хлор-изохинолин-1-ил)-уксусной кислоты. Данное соединение растворяют в насыщенном этаноловом растворе HCl (200 мл) и нагревают с обратным холодильником в течение 15 мин. Концентрирование приводит к получению титульного соединения с количественным выходом. Данные ¹Н ЯМР-спектрометрии (ДМСО, 400 МГц) δ 1,17 (t, J=8,8, 3Н), 4,11 (q, J=8,8, 2Н), 4,28 (s, 2H), 7,51-7,57 (m, 1H), 7,61 (s, 1H), 7,61-7,66 (m, 1H), 7,72 (d, J=8,8, 1H), 7,98 (d, J=8,8, 1H); ES-MS: 250 [М+Н]⁺.

Согласно процедуре, соответствующей примеру 163, но при использовании соответствующих исходных материалов могут быть получены соединения формулы I, в которой R представляет собой остаток формулы (д), как показано в таблице 5.

Таблица 5
Пример	R9	Ra	Rb	Данные M.S.
70	-(4,7-диаза-спиро[2.5]окт-7-ил)	СН3	Н	MH+ 465
71	3-этил-пиперазин-1-ил	СН3	Н	МН+ 467
72	-(4,7-диаза-спиро[2.5]окт-7-ил)	Н	Н	MH+ 451
73	3-этил-1-пиперазинил	Н	Н	MH+ 453
74	3-R-метил-пиперазин-1-ил	СН3	Н	МН+ 453
75	3-R-метил-пиперазин-1-ил	Н	Н	MH+ 439
76	3-S-метил-пиперазин-1-ил	СН3	Н	МН+ 453
77	3-S-метил-пиперазин-1-ил	Н	Н	MH+ 439
78	4-метил-3-S-метил-пиперазин-1-ил	СН3	Н	МН+ 467
79	4-метил-3-S-метил-пиперазин-1-ил	Н	Н	МН+ 453
80*	4,7-диаза-спиро[2.5]окт-7-ил	СН3	Н	МН+ 464
81	4,7-диаза-спиро[2.5]окт-7-ил	Н	F	MH+ 479
82	4,7-диаза-спиро[2.5]окт-7-ил	СН2-СН3	Н	MH+ 479
83	4,7-диаза-спиро[2.5]окт-7-ил	Н	СН(СН3)2	МН+ 495
84	4,7-диаза-спиро[2.5]окт-7-ил	Н	ОСН3	MH+ 471
85	4,7-диаза-спиро[2.5]окт-7-ил	СН3	СН2-СН3	MH+ 451
86	4,7-диаза-спиро[2.5]окт-7-ил	Н	СН2-СН3	МН+ 465
87	4,7-диаза-спиро[2.5]окт-7-ил	СН(СН3)2	Н	MH+ 451
88	4,7-диаза-спиро[2.5]окт-7-ил	СН3	СН3	МН+ 479
89	4,7-диаза-спиро[2.5]окт-7-ил	СН3	Cl	МН+ 499
90	4,7-диаза-спиро[2.5]окт-7-ил	Н	Cl	МН+ 485
91	4,7-диаза-спиро[2.5]окт-7-ил	СН2-СН3	СН3	MH+ 492
92	3-этил-пиперазин-1-ил	CH2-СН3	СН2-СН3	МН+ 494
* Соединение, соответствующее примеру 80, превращают в его бис-трифторацетатную или ацетатную соль.

Соединения формулы I в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли проявляют ценные фармакологические свойства, например ингибируют активность протеинкиназы С (ПКС), например изоформ ПКС, таких как α, β, δ, ε, η или θ, подавляют активацию и пролиферацию Т-клеток, например путем ингибирования продукции Т-клеток или цитокинов, например ИЛ-2, посредством подавления пролиферативного ответа Т-клеток или цитокинов, например ИЛ-2, например, как показано в тестах in vitro и in vivo, и на основании этого предложено их терапевтическое применение.

A. In vitro

1. Анализ с использованием протеинкиназы С

Соединения формулы I тестируют на активность в отношении различных изоформ ПКС согласно опубликованному методу (см. D. Geiges et al., Biochem. Pharmacol., 1997, 53:865-875). Анализ проводят в 96-луночной полипропиленовой плате для микротитрования (Costar 3794), которую предварительно силиконизируют с использованием Sigmacote® (Sigma SL-2). Реакционная смесь (50 мкл) содержит 10 мкл соответствующего изомера ПКС, а также 25 мкл тест-соединения и 15 мкл смешанного раствора, который содержит 200 мг/мл сульфата протамина, 10 мМ Mg(NO₃)₂, 10 мкМ АТФ (Boehringer 519987) и 3750 Бк ³³Р-АТФ (Hartmann Analytic SFC301, 110 ТБк/ммоль) в 20 мМ Трис-буфере рН 7,4+0,1% БСА (бычьего сывороточного альбумина). Инкубирование проводят в течение 15 мин при температуре 32°С в термостате со встряхиванием для плат для микротитрования (Biolabo Scientific Instruments). Реакцию останавливают добавлением 10 мкл 0,5 М Na₂ЭДТК (этилендиаминтетрауксусной кислоты), рН 7,4. 50 мкл смеси пипеткой наносят на предварительно увлажненную фосфоцеллюлозную бумагу (Whatmann 3698-915) при осторожном надавливании. Неинкорпорированную АТФ отмывают с использованием 100 мкл бидистиллированной H₂O. Бумагу дважды промывают в 0,5% Н₃PO₄ в течение 15 мин, а затем в течение 5 мин в EtOH. После этого бумагу сушат и помещают в универсальный фильтр (Packard 6005219) и накрывают слоем Microscint-O (Packard 6013611) в количестве 10 мл/лунку перед подсчетом в счетчике радиоактивности Topcount (Packard). Измерение IC₅₀ (50% подавляющей или ингибирующей концентрации) проводят на рутинной основе путем инкубирования серийного разведения ингибитора в концентрациях, лежащих в интервале от 1 до 1000 мкМ согласно нижеописанному методу. Значения IC₅₀ рассчитывают с помощью графика в виде эмпирической сигмоидальной кривой.

2. Анализ протеинкиназы С θ

Человеческую рекомбинантную ПКС θ используют в условиях анализа, как описано выше. В данном анализе соединения формулы I ингибируют ПКС θ с IC₅₀≤1 мкМ. Соединение, соответствующее Примерам 33 и 69, ингибирует ПКС θ в данном анализе с IC₅₀ 6,8 и 12,1 нМ, соответственно.

3. Анализ протеинкиназы Сα

Человеческую рекомбинантную ПКСα получают из фирмы Oxford Biomedical Research и используют в условиях анализа, как описано выше в Разделе A.1. В данном анализе соединения формулы I ингибируют ПКСα с IC₅₀≤1 мкМ. Соединение, соответствующее примеру 29, ингибирует ПКСα в данном анализе с IC₅₀ 4,3 нМ.

4. Анализ протеинкиназы С β1

Человеческую рекомбинантную ПКСβ1 получают из фирмы Oxford Biomedical Research и используют в условиях анализа, как описано выше в Разделе A.1. В данном анализе соединения формулы I ингибируют ПКСβ1 с IC₅₀≤1 мкМ. Соединение, соответствующее Примеру 33, ингибирует ПКСβ1 в данном анализе с IC₅₀ 19,6 нМ.

5. Анализ протеинкиназы Сδ

Человеческую рекомбинант