Противоопухолевое средство, задействующее соединения с ингибирующим эффектом к киназам в комбинации

Противоопухолевое средство, задействующее соединения с ингибирующим эффектом к киназам в комбинации

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область изобретения

[0001] Настоящее изобретение относится к противоопухолевому средству для комбинированного применения соединений, обладающих ингибирующим эффектом к киназам. В частности, настоящее изобретение относится к противоопухолевому средству для комбинированного применения соединения, обладающего ингибирующим эффектом к HGFR, и соединения, обладающего ингибирующим эффектом к многим тирозинкиназам.

Предпосылки изобретения

[0002]

,

где R¹ представляет собой азетидинил и подобное, R²-R⁵ представляют собой атом водорода или атом галогена, R⁶ представляет собой С_3-8циклоалкил и подобное, R⁷ представляет собой атом водорода и подобное, R⁸ представляет собой атом галогена и подобное.

[0003] Соединение, представленное формулой (I), обладает сильными ингибирующими эффектами в отношении рецептора фактора роста гепатоцитов (HGFR) и, следовательно, полезно в качестве противоопухолевого средства, ингибитора ангиогенеза и ингибитора метастазирования опухоли (патентная литература 1). Известно, что HGFR сверхэкспрессирован в большом количестве опухолевых клеток (непатентная литература 1) и участвует в злокачественном изменении опухолей. Кроме того, HGFR экспрессирован также в клетках эндотелия сосудов и считается причиной пролиферации опухолей путем стимулирования ангиогенеза (непатентная литература 2).

[0004] С другой стороны, соединение, представленное формулой (II), обладает антиангиогенными действиями (патентная литература 2), ингибирующими эффектами (патентная литература 3-6) в отношении тирозинкиназ, которые, как сообщается, участвуют в злокачественных изменениях опухолей (непатентная литература 3-5), и т.п.; и известно как терапевтическое средство для лечения различных опухолей, таких как рак щитовидной железы, рак легких, меланома, рак эндометрия, рак желудка и рак мочевого пузыря.

[0005] В общем, противоопухолевые средства часто являются неэффективными для всех пациентов, когда их применяли по отдельности. Таким образом, до настоящего времени предпринимались попытки увеличить показатель эффективности лечения путем комбинации нескольких противоопухолевых средств (патентная литература 7-9).

Перечень ссылок Патентная литература

[0006] Патентная литература 1: WO 2007/023768

Патентная литература 2: WO 2002/032872

Патентная литература 3: WO 2004/080462

Патентная литература 4: WO 2007/061130

Патентная литература 5: WO 2007/136103

Патентная литература 6: WO 2008/026748

Патентная литература 7: WO 2009/140549

Патентная литература 8: Публикация заявки на патент США №2004-259834

Патентная литература 9: Патент США №6217866 Непатентная литература

[0007] Непатентная литература 1: Oncology Reports, 5, 1013-1024, 1998.

Непатентная литература 2: Advances in Cancer Research, 67, 257-279,1995.

Непатентная литература 3: Current Cancer Drug Targets, 6, 65-75, 2006.

Непатентная литература 4: Nature Reviews, Cancer, 10,116-129, 2010.

Непатентная литература 5: Clinical Cancer Research, 15, 7119-7123, 2009.

Краткое описание изобретения

Техническая проблема

[0008] Однако терапевтические эффекты, о которых сообщалось до настоящего времени, полученные путем комбинации нескольких противоопухолевых средств, были недостаточными, а следовательно, необходима разработка новой комбинированной терапии с применением противоопухолевых средств.

Решение проблемы

[0009] В связи с такими обстоятельствами авторы настоящего изобретения вели интенсивное изучение, чтобы обнаружить, что введение комбинации соединений, представленных формулой (I) и формулой (II), пациенту, страдающему от опухоли, достигает неожиданно высокого противоопухолевого эффекта, таким образом осуществляя настоящее изобретение.

[0010] Т.е. настоящее изобретение предусматривает пункты [1]-[8] ниже.

[1] Противоопухолевые средство для комбинированного применения:

соединения или его фармацевтически приемлемой соли, представленных формулой (I):

,

где R¹ представляет собой азетидинил, пиперидинил или формулу -NR^11aR^11b, каждый из которых необязательно имеет заместитель, выбранный из группы заместителей А, где R^11a и R^11b являются одинаковыми или различными, и каждый представляет собой атом водорода, C_1-6алкил или пиперидинил, необязательно содержащий C_1-6алкил, группа заместителей А состоит из гидроксила, пиперазинила, необязательно содержащего метил, и азетидинила, необязательно содержащего диметиламино, и R²-R⁵ являются одинаковыми или различными, и каждый представляет собой атом водорода или атом фтора; и

соединения или его фармацевтически приемлемой соли, представленных формулой (II):

,

где R⁶ представляет собой С_1-6алкил или С_3-8циклоалкил, R⁷ представляет собой атом водорода, C_1-6алкил или C_1-6алкокси, и R⁸ представляет собой атом водорода или атом галогена.

[2] Противоопухолевое средство одновременного или раздельного введения соединения или его фармацевтически приемлемой соли, представленных вышеуказанной формулой (I), и соединения или его фармацевтически приемлемой соли, представленных вышеуказанной формулой (II).

[3] Противоопухолевое средство, содержащее соединение или его фармацевтически приемлемую соль, представленные вышеуказанной формулой (I), и соединение или его фармацевтически приемлемую соль, представленные вышеуказанной формулой (II).

[4] Соединение или его фармацевтически приемлемая соль, представленные формулой (II), для терапии опухоли путем комбинированного применения с соединением или его фармацевтически приемлемой солью, представленными вышеуказанной формулой (I).

[5] Соединение или его фармацевтически приемлемая соль, представленные формулой (I), для терапии опухоли путем комбинированного применения с соединением или его фармацевтически приемлемой солью, представленными вышеуказанной формулой (II).

[6] Способ лечения опухоли, где соединение или его фармацевтически приемлемая соль, представленные вышеуказанной формулой (I), и соединение или его фармацевтически приемлемая соль, представленные формулой (II), применяют в комбинации.

[7] Фармацевтическая композиция, содержащая соединение или его фармацевтически приемлемую соль, представленные вышеуказанной формулой (I), соединение или его фармацевтически приемлемую соль, представленные формулой (II), и наполнитель.

[8] Набор, включающий:

фармацевтическую композицию, содержащую соединение или его фармацевтически приемлемую соль, представленные вышеуказанной формулой (I), и наполнитель, и

фармацевтическую композицию, содержащую соединение или его фармацевтически приемлемую соль, представленные формулой (II), и наполнитель.

[0011] Соединение, представленное вышеуказанной формулой (I), предпочтительно представляет собой одно или несколько соединений, выбранных из группы, включающей:

N-(2-фтор-4-{[2-({[4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил]карбонил}амино)пиридин-4-ил]окси}фенил)-N'-(4-фторфенил)циклопропан-1,1-дикарбоксамид:

,

N-[4-({2-[({4-[3-(диметиламино)азетидин-1-ил]пиперидин-1-ил}карбонил)амино]пиридин-4-ил}окси)-2-фторфенил]-N'-(4-фторфенил)циклопропан-1,1-дикарбоксамид:

,

N-{2,5-дифтор-4-[(2-{[(3-гидроксиазетидин-1-ил)карбонил]амино}пиридин-4-ил)окси]фенил}-N'-(4-фторфенил)циклопропан-1,1-дикарбоксамид:

,

N-{2,5-дифтор-4-[(2-{[4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил]карбонил}амино)пиридин-4-ил]окси}фенил)-N'-(4-фторфенил)циклопропан-1,1-дикарбоксамид:

,

и

N-(2,5-дифтор-4-{[2-({[метил(1-метилпиперидин-4-ил)амино]карбонил}амино)пиридин-4-ил]окси}фенил)-N'-(4-фторфенил)циклопропан-1,1-дикарбоксамид:

,

и более предпочтительно

N-(2-фтор-4-{[2-({[4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил]карбонил}амино)пиридин-4-ил]окси}фенил)-N'-(4-фторфенил)циклопропан-1,1-дикарбоксамид:

.

Соединение, представленное вышеуказанной формулой (II), предпочтительно представляет собой одно или несколько соединений, выбранных из группы, включающей:

4-[3-хлор-4-(циклопропиламинокарбонил)аминофенокси]-7-метокси-6-хинолинкарбоксамид:

,

4-[3-хлор-4-(метиламинокарбонил)аминофенокси]-7-метокси-6-хинолинкарбоксамид:

,

4-[3-хлор-4-(этиламинокарбонил)аминофенокси]-7-метокси-6-хинолинкарбоксамид:

,

N-6-метокси-4-(3-хлор-4-{[(циклопропиламино)карбонил)амино]фенокси}-7-метокси-6-хинолинкарбоксамида:

,

и

N-6-метокси-4-(3-хлор-4-{[(этиламино)карбонил]амино}фенокси)-7-метокси-6-хинолинкарбоксамида:

,

и более предпочтительно

4-[3-хлор-4-(циклопропиламинокарбонил)аминофенокси]-7-метокси-6-хинолинкарбоксамид:

.

Полезные эффекты настоящего изобретения

[0012] Настоящее изобретение предлагает противоопухолевое средство для комбинированного применения соединения, обладающего ингибирующим эффектом к HGFR, и соединения, обладающего ингибирующим эффектом к многим тирозинкиназам. Такое противоопухолевое средство демонстрирует превосходный противоопухолевый эффект в сравнении со случаями, когда их применяют по отдельности, и демонстрирует противоопухолевые эффекты в отношении различных видов рака.

Краткое описание графических материалов

[0013] Фигура 1 представляет собой график, который показывает сочетанный эффект соединения А и соединения В у модельного животного, которому трансплантировали клеточную линию злокачественной меланомы человека (SEKI).

Фигура 2 представляет собой график, который показывает сочетанный эффект соединения А и соединения В у модельного животного, которому трансплантировали клеточную линию рака поджелудочной железы человека (КР-4).

Фигура 3 представляет график, который показывает сочетанный эффект соединения А и соединения В у модельного животного, которому трансплантировали клеточную линию рака желудочно-кишечного тракта человека (IM95m).

Фигура 4 представляет собой график, который показывает сочетанный эффект соединения А и соединения В у модельного животного, которому трансплантировали клеточную линию рака яичников человека (А2780).

Фигура 5 представляет собой график, который показывает сочетанный эффект соединения А и соединения В у модельного животного, которому трансплантировали клеточную линию шиобластомы человека (U87MG).

Описание вариантов осуществления

[0014] Соединение или его фармацевтически приемлемая соль, представленные формулой (I), согласно настоящему изобретению могут быть получены способом, описанным в патентной литературе 1. Далее, соединение или его фармацевтически приемлемая соль, представленные формулой (II), согласно настоящему изобретению могут быть получены способом, описанным в патентной литературе 2.

[0015] Примеры фармацевтически приемлемой соли включают соли неорганических кислот, соли органических кислот, соли неорганических оснований, соли органических оснований и соли кислых или основных аминокислот.

[0016] Предпочтительные примеры солей неорганических кислот включают соли соляной кислоты, бромистоводородной кислоты, серной кислоты, азотной кислоты, фосфорной кислоты и подобные. Предпочтительные примеры солей органических кислот включают соли уксусной кислоты, янтарной кислоты, фумаровой кислоты, малеиновой кислоты, винной кислоты, лимонной кислоты, молочной кислоты, стеариновой кислоты, бензойной кислоты, метансульфоновой кислоты, этансульфоновой кислоты, п-толуолсульфоновой кислоты и подобные.

[0017] Предпочтительные примеры солей неорганических оснований включают соли щелочных металлов, такие как соль натрия и соль калия, соли щелочноземельных металлов, такие как соль кальция и соль магния; соль алюминия; и соль аммония. Предпочтительные примеры солей органических оснований, включают соли диэтиламина, диэтаноламина, меглюмина, N,N-дибензилэтилендиамина и подобные.

[0018] Предпочтительные примеры солей кислых аминокислот включают соли аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты и подобные. Предпочтительные примеры солей основных аминокислот включают соли аргинина, лизина, орнитина и подобные.

[0019] Особенно предпочтительными фармацевтически приемлемыми солями являются соли органических кислот.

[0020] Противоопухолевое средство настоящего изобретения можно вводить перорально в виде твердого состава, такого как таблетка, гранула, мелкая гранула, порошок или капсула, или в виде жидкости, желе, сиропа и т.п.

[0021] Далее, противоопухолевое средство настоящего изобретения можно вводить парентерально в виде инъекции, суппозитория, мази, припарки и т.п.

[0022] Дозу соединения или его фармацевтически приемлемой соли, представленных формулой (I), можно выбирать надлежащим образом в зависимости от тяжести симптомов, возраста, пола и массы тела пациента, разницы в чувствительности, пути введения, времени и интервала введения, типа фармацевтического состава и/или подобного. Как правило, в тех случаях, когда пероральное введение проводят для взрослого (масса тела 60 кг), доза составляет от 10 до 6000 мг, предпочтительно от 50 до 4000 мг в день. Ее можно вводить в один прием, или дробно за 2 или 3 приема в день.

[0023] Дозу соединения или его фармацевтически приемлемой соли, представленных формулой (II), можно выбирать надлежащим образом, как и в описанном выше случае. Как правило, в тех случаях, когда пероральное введение проводят для взрослого (масса тела 60 кг), доза составляет от 1 до 600 мг, предпочтительно от 4 до 400 мг, более предпочтительно от 4 до 200 мг в день. Ее можно вводить в один прием, или дробно в 2 или 3 приема в день.

[0024] В случаях, когда готовят пероральный твердый состав, к основному компоненту, т.е. соединению или его фармацевтически приемлемой соли, представленным формулой (I), и соединению или его фармацевтически приемлемой соли, представленным формулой (II), можно добавить наполнитель и, по мере необходимости, связующее вещество, дезинтегратор, смазку, краситель, ароматизатор и/или подобное, чтобы приготовить впоследствии таблетку, гранулу, мелкую гранулу, порошок, капсулу и подобное в соответствии с общепринятым методом.

[0025] Примеры наполнителя включают лактозу, кукурузный крахмал, белый мягкий сахар, глюкозу, сорбит, кристаллическую целлюлозу и диоксид кремния. Примеры связующего вещества включают поливиниловый спирт, этилцеллюлозу, метилцеллюлозу, гуммиарабик, гидроксипропилцеллюлозу и гидроксипропилметилцеллюлозу. Примеры смазки включают стеарат магния, тальк и диоксид кремния. Примеры красителя включают оксид титана, полуторную окись железа, желтую полуторную окись железа, кошениль, кармин и рибофлавин. Примеры ароматизаторов включают какао-порошок, аскорбиновую кислоту, винную кислоту, масло мяты перечной, борнеол и порошок корицы. Эти таблетки и гранулы могут быть покрыты при необходимости.

[0026] В случаях, когда готовят инъекцию, к основному компоненту при необходимости можно добавлять регулятор рН, буферное средство, суспендирующее средство, солюбилизатор, стабилизатор, изотоническое средство, консервант и/или подобное для подготовки внутривенной, подкожной или внутримышечной инъекции или капельного внутривенного вливания. При необходимости их можно приготовить в виде лиофилизированных продуктов общепринятыми способами.

[0027] Примеры суспендирующего средства включают метилцеллюлозу, полисорбат 80, гидроксиэтилцеллюлозу, гуммиарабик, порошкообразный трагакант, натрия карбоксиметилцеллюлозу и полиоксиэтилен сорбитан монолаурат.

[0028] Примеры солюбилизатора включают гидрогенизированное полиоксиэтиленом касторовое масло, полисорбат 80, никотинамид, полиоксиэтилен сорбитан монолаурат, макрогол и сложный эфир глицерина и жирной кислоты.

[0029] Примеры стабилизатора включают натрия сульфит и натрия метабисульфит. Примеры консерванта включают метилпарагидроксибензоат, этилпарагидроксибензоат, сорбиновую кислоту, фенол, крезол и хлоркрезол.

[0030] Противоопухолевое средство настоящего изобретения можно получить путем составления соединения или его фармацевтически приемлемой соли, представленных формулой (I), и соединения или его фармацевтически приемлемой соли, представленных формулой (II), по отдельности, и оба можно вводить либо одновременно, либо по отдельности. Далее, два состава можно помещать в единую упаковку, чтобы обеспечить так называемый состав в наборе. Далее, оба соединения могут содержаться в едином составе.

[0031] Тип опухоли, которую необходимо лечить противоопухолевым средством данного изобретения, неограничен, и его примеры включают фиброму, липому, миксому, хондрому, остеому, ангиому, лимфому, миелому, меланому, миому, неврому, глиому, остеосаркому, миосаркому, фибросаркому, папиллому, аденому, опухоль головного мозга и виды рака, такие как рак шейки матки, рак пищевода, рак языка, рак легкого, рак молочной железы, рак поджелудочной железы, рак желудка, рак тонкого кишечника в двенадцатиперстной кишке, тощей кишке, подвздошной кишке и подобное, рак толстой кишки в ободочной кишке, слепой кишке, прямой кишке и подобное, рак мочевого пузыря, рак почки, рак печени, рак желчного пузыря, рак предстательной железы, рак матки, рак яичников, рак щитовидной железы и рак глотки, и их смешанные опухоли.

Примеры

[0032] Настоящее изобретение описано более подробно в виде примеров ниже.

[Список сокращений]

FBS: Эмбриональная бычья сыворотка

EDTA: Этилендиаминтетрауксусная кислота

TV: Объем опухоли

RTV: Относительный объем опухоли

Соединение А: 4-(3-хлор-4-(циклопропиламинокарбонил)аминофенокси)-7-метокси-6-хинолинкарбоксамидмезилат

Соединение В: N-(2-фтор-4-{[2-({[4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил]карбонил}амино)пиридин-4-ил]окси}фенил)-N'-(4-фторфенил)циклопропан-1,1-дикарбоксамида тартрат

[0033] Пример 1: сочетанный эффект соединения А и соединения В у модельного животного, которому трансплантировали клеточную линию злокачественной меланомы человека (SEKI)

Клеточную линию злокачественной меланомы человека SEKI (банк клеток JCRB) культивировали при помощи среды RPMI 1640, содержащей 10% FBS (SIGMA), в термостате с 5% СО₂ в условиях 37°С. Когда клетки достигли состояния около 80% слияния, клетки собрали при помощи трипсина-EDTA. К этим клеткам добавили сбалансированный солевой раствор Хэнкса, содержащий 50% матригеля, для приготовления взвеси с 5,0×10⁷ клеток/мл. Взвесь клеток, полученную таким образом, трансплантировали подкожно на боковую сторону тела бестимусной мыши (CAnN.Cg-Foxnlnu/CrlCrlj, Charles River Laboratories Japan, Inc.) в количестве 0,1 мл, где каждая группа включала шесть мышей. Через 11 дней после трансплантации соединение А (10 мг/кг, один раз в день, в течение 17 дней) и соединение В (100 мг/кг, один раз в день, в течение 17 дней) вводили перорально либо отдельно, либо оба подряд.

Задавая начальный день введения в день 0, большую ось и малую ось опухоли, развившейся у каждой мыши, измеряли впоследствии при помощи штангенциркуля Digimatic (Mitsutoyo Corporation) в день 3, 7, 10, 14 и 17.

Объем опухоли и относительный объем опухоли рассчитывали по уравнениям ниже.

TV = большая ось (мм) × малая ось² (мм²)/2

RTV = TV в день измерения/TV в начальный день введения

Результаты RTV обобщили в таблице 1 и фигуре 1. Числа в таблице указывают среднее значение ± стандартное отклонение (то же самое относится к последующим таблицам). По сравнению со случаями, когда соединение А и соединение В вводили каждое отдельно, комбинированное применение соединения А и соединения В продемонстрировало в высшей степени превосходный противоопухолевый эффект. Также в результате проведения двухфакторного дисперсионного анализа в отношении логарифмически преобразованного RTV, задавая соединение А и соединение В в качестве факторов, RTV в день 17 оказался статистически значимым (р<0,05), таким образом синергический эффект соединения А и соединения В был подтвержден.

[0034]

[Таблица 1]
	День 3	День 7	День 10
Контрольная группа	1,63±0,10	3,35±0,56	4,95±1,00
Группа соединения А	1,71±0,19	2,88±0,35	3,74±0,53
Группа соединения В	1,76±0,22	2,93±0,57	4,06±0,85
Группа комбинации соединения А и соединения В	1,43±0,06	2,10±0,38	2,66±0,19
	День 14	День 17
Контрольная группа	7,18±1,66	8,65±1,89
Группа соединения А	5,06±0,49	5,92±0,50
Группа соединения В	5,23±0,20	5,80±1,35
Группа комбинации соединения А и соединения В	2,80±0,27	2,77±0,38

[0035] Пример 2: сочетанный эффект соединения А и соединения В у модельного животного, которому трансплантировали клеточную линию рака поджелудочной железы человека (КР-4)

Клеточную линию рака поджелудочной железы человека КР-4 (приобретенную в онкологическом центре на Кюсю Национальной организации госпиталей) культивировали с применением среды RPMI 1640, содержащей 10% FBS (SIGMA), в термостате с 5% CO₂ в условиях 37°С. Когда клетки достигли состояния около 80% слияния, клетки собрали при помощи трипсина-EDTA. К этим клеткам добавили сбалансированный солевой раствор Хэнкса, содержащий 50% матригеля, для приготовления взвеси с 5,0×10⁷ клеток/мл. Взвесь клеток, полученную таким образом, пересадили подкожно на боковую сторону тела бестимусной мыши (CAnN.Cg-Foxnlnu/CrlCrlj, Charles River Laboratories Japan, Inc.) в количестве 0,1 мл, где каждая группа включала шесть мышей. Через 11 дней после трансплантации соединение А (10 мг/кг, один раз в день, в течение 17 дней) и соединение В (100 мг/кг, один раз в день, в течение 17 дней) вводили перорально либо отдельно, либо оба подряд.

Задавая начальный день введения в день 0, большую ось и малую ось опухоли, развившейся у каждой мыши, измеряли впоследствии при помощи штангенциркуля Digimatic (Mitsutoyo Corporation) в день 3, 7, 10, 14 и 17.

Объем опухоли и относительный объем опухоли рассчитывали согласно уравнениям ниже.

TV = большая ось (мм) × малая ось² (мм²)/2

RTV = TV в день измерения/TV в начальный день введения

Результаты RTV обобщили в таблице 2 и на фигуре 2. По сравнению со случаями, когда соединение А и соединение В вводили каждое отдельно, комбинированное применение соединения А и соединения В продемонстрировало в высшей степени превосходный противоопухолевый эффект. Также в результате проведения двухфакторного дисперсионного анализа в отношении логарифмически преобразованного RTV, задавая соединение А и соединение В в качестве факторов, RTV на день 17 оказался статистически значимым (р<0,05), посредством чего синергический эффект соединения А и соединения В был подтвержден.

[0036]

[Таблица 2]
	День 3	День 7	День 10
Контрольная группа	2,27±0,25	4,68±0,70	7,12±1,35
Группа соединения А	1,67±0,16	2,89±0,74	3,77±1,26
Группа соединения В	1,71±0,26	3,33±1,06	4,72±1,55
Группа комбинации соединения А и соединения В	1,40±0,14	1,54±0,24	1,64±0,23
	День 14	День 17
Контрольная группа	9,65±2,61	9,92±3,07
Группа соединения А	4,83±1,75	5,81±2,17
Группа соединения В	6,53±2,19	9,05±3,71
Группа комбинации соединения А и соединения В	1,79±0,32	2,13±0,52

[0037] Пример 3: сочетанный эффект соединения А и соединения В у модельного животного, которому трансплантировали клеточную линию рака желудка человека (IM95m)

Клеточную линию рака желудка человека IM95m (Health Science Research Resources Bank) культивировали с применением среды DMEM (Wako Pure Chemical Industries, Ltd), содержащей 4500 мг/мл глюкозы, 10% FBS и 10 мкг/мл инсулина, в термостате с 5% CO₂, в условиях 37°С. Когда клетки достигли состояния около 80% слияния, клетки собрали при помощи трипсина-EDTA. К этим клеткам добавили сбалансированный солевой раствор Хэнкса, содержащий 50% матригеля, для приготовления взвеси с 1,0×10⁸ клеток/мл. Взвесь клеток, полученную таким образом, пересадили подкожно на боковую сторону тела бестимусной мыши (CAnN.Cg-Foxnlnu/CrlCrlj, Charles River Laboratories Japan, Inc.) в количестве 0,1 мл, где каждая группа включала шесть мышей. Через 13 дней после пересадки соединение А (10 мг/кг, один раз в день, в течение 21 дня) и соединение В (100 мг/кг, один раз в день, в течение 21 дня) вводили перорально либо индивидуально, либо оба подряд.

Задавая начальный день введения в день 0, большую ось и малую ось опухоли, развившейся у каждой мыши, измеряли впоследствии при помощи штангенциркуля Digimatic (Mitsutoyo Corporation) на день 4, 7, 11, 14, 18 и 21.

Объем опухоли и относительный объем опухоли рассчитывали согласно уравнениям ниже.

TV = большая ось (мм) × малая ось² (мм²)/2

RTV = TV в день измерения/TV в начальный день введения

Результаты RTV обобщили в таблице 3 и на фигуре 3. По сравнению со случаями, когда соединение А и соединение В вводили каждое отдельно, комбинированное применение соединения А и соединения В продемонстрировало в высшей степени превосходный противоопухолевый эффект. Несмотря на отсутствие статистической значимости, показанное двухфакторным дисперсионным анализом, эффект полного ингибирования пролиферации опухоли был подтвержден при комбинированном применении соединения А и соединения В.

[0038]

[Таблица 3]
	День 4	День 7	День 11
Контрольная группа	1,97±0,16	2,87±0,20	4,91±0,64
Группа соединения А	1,53±0,12	2,10±0,18	2,65±0,37
Группа соединения В	1,12±0,08	1,24±0,15	1,75±0,17
Группа комбинации соединения А и соединения В	0,92±0,12	0,89±0,22	0,76±0,09
	День 14	День 18	День 21
Контрольная группа	6,27±0,83	8,38±1,41	10,36±1,74
Группа соединения А	2,65±0,49	2,80±0,47	3,18±0,57
Группа соединения В	1,85±0,16	3,09±0,48	4,02±1,05
Группа комбинации соединения А и соединения В	0,73±0,15	0,91±0,14	1,00±0,25

[0039] Пример 4: сочетанный эффект соединения А и соединения В у модельного животного, которому трансплантировали клеточную линию рака яичников человека (А2780)

Клеточную линию рака яичников человека А2780 (АТСС) культивировали с применением среды RPMI 1640, содержащей 10% FBS (SIGMA), в термостате с 5% CO₂ в условиях 37°С. Когда клетки достигли состояния около 80% слияния, клетки собрали при помощи трипсина-EDTA. К этим клеткам добавили сбалансированный солевой раствор Хэнкса, содержащий 50% матригеля, для приготовления взвеси с 5,0×10⁷ клеток/мл. Взвесь клеток, полученную таким образом, пересадили подкожно на боковую сторону тела бестимусной мыши (CAnN.Cg-Foxnlnu/CrlCrlj, Charles River Laboratories Japan, Inc.) в количестве 0,1 мл, где каждая группа включала шесть мышей. Соединение А (10 мг/кг, один раз в день, в течение 10 дней) и соединение В (100 мг/кг, один раз в день, в течение 10 дней) вводили перорально либо индивидуально, либо оба подряд.

Задавая начальный день введения в день 0, большую ось и малую ось опухоли, развившейся у каждой мыши, измеряли впоследствии при помощи штангенциркуля Digimatic (Mitsutoyo Corporation) на день 3, 5, 8 и 10.

Объем опухоли и относительный объем опухоли рассчитывали согласно уравнениям ниже.

TV = большая ось (мм) × малая ось² (мм²)/2

RTV = TV в день измерения/TV в начальный день введения

Результаты RTV обобщили в таблице 4 и на фигуре 4. По сравнению со случаями, когда соединение А и соединение В вводили каждое отдельно, комбинированное применение соединения А и соединения В продемонстрировало в высшей степени превосходный противоопухолевый эффект. Также в результате проведения двухфакторного дисперсионного анализа в отношении логарифмически преобразованного RTV, задавая соединение А и соединение В в качестве факторов, RTV надень 10 оказался статистически значимым (р<0,05), посредством чего синергический эффект соединения А и соединения В был подтвержден.

[0040]

[Таблица 4]
	День 3	День 5
Контрольная группа	2,37±0,60	7,52±1,45
Группа соединения А	1,92±0,17	4,77±0,85
Группа соединения В	2,23±0,42	7,01±1,54
Группа комбинации соединения А и соединения В	1,38±0,12	1,95±0,27
	День 8	День 10
Контрольная группа	17,47±3,75	20,41±6,02
Группа соединения А	9,51±2,44	12,37±3,53
Группа соединения В	15,70±2,27	21,29±2,76
Группа комбинации соединения А и соединения В	2,50±0,76	3,34±1,30

[0041] Пример 5: сочетанный эффект соединения А и соединения В у модельного животного, которому трансплантировали клеточную линию глиобластомы человека (U87MG)

Клеточную линию глиобластомы человека (U87MG) (Американская коллекция типовых культур) культивировали с применением среды Е-МЕМ, содержащей 10% FBS (SIGMA), в термостате с 5% CO₂ в условиях 37°С. Когда клетки достигли состояния около 80% слияния, клетки собрали при помощи трипсина-EDTA. К этим клеткам добавили сбалансированный солевой раствор Хэнкса, содержащий 50% матригеля, для приготовления взвеси с концентрацией 5,0×10⁷ клеток/мл. Взвесь клеток, полученную таким образом, пересадили подкожно на боковую сторону тела бестимусной мыши (CAnN.Cg-FOXnlnu/CriCrlj, Charles River Laboratories Japan, Inс.)в количестве 0,1 мл, где каждая группа включала шесть мышей. Соединение А (10 мг/кг, один раз в день, в течение 21 дня) и соединение В (100 мг/кг, один раз в день, в течение 21 дня) вводили перорально либо индивидуально, либо оба подряд.

Задавая начальный день введения в день 0, большую ось и малую ось опухоли, развившейся у каждой мыши, измеряли впоследствии при помощи штангенциркуля Digimatic (Mitsutoyo Corporation) надень 2, 5, 7, 9, 12, 14, 16, 19 и 21.

Объем опухоли и относительный объем опухоли рассчитывали согласно уравнениям ниже.

TV = большая ось (мм) × малая ось² (мм²)/2

RTV = TV в день измерения/TV в начальный день введения

Результаты RTV обобщили в таблице 5 и на фигуре 5. По сравнению со случаями, когда соединение А и соединение В вводили каждое отдельно, комбинированное применение соединения А и соединения В продемонстрировало в высшей степени превосходный противоопухолевый эффект. Также, несмотря на отсутствие статистической значимости, показанное двухфакторным дисперсионным анализом, выполненным в отношении логарифмически преобразованного RTV, задавая соединение А и соединение В в качестве факторов, эффект полного ингибирования пролиферации опухоли был подтвержден при комбинированном применении соединения А и соединения В.

[0042]

[Таблица 5]
	День 2	День 5	День 7
Контрольная группа	1,30±0, 19	1,86±0,45	2,45±0,71
Группа соединения А	0,95±0,08	1,27±0,07	1,59±0,16
Группа соединения В	0,69±0,05	0,61±0,05	0,56±0,10
Группа комбинации соединения А и соединения В	0,59±0,05	0,49±0,10	0,44±0,09
	День 9	День 12	День 14
Контрольная группа	3,19±0,89	5,71±1,58	8,88±2,26
Группа соединения А	1,85±0,13	3,29±0,32	4,76±0,49
Группа соединения В	0,57±0,07	0,65±0,08	0,73±0,12
Группа комбинации соединения А и соединения В	0,36±0,11	0,48±0,16	0,46±0,17
	День 16	День 19	День 21
Контрольная группа	12,13±3,46	18,47±6,88	23,08±8,72
Группа соединения А	6,19±0,95	9,60±1,99	11,53±2,57
Группа соединения В	0,93±0,13	1,65±0,37	2,23±0,51
Группа комбинации соединения А и соединения В	0,59±0,20	0,78±0,26	0,95±0,38

1. Противоопухолевое лекарственное средство для комбинированного применения соединения или его фармацевтически приемлемой соли формулы (I): представляющего собой N-(2-фтор-4-{[2-({[4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил]карбонил}амино)пиридин-4-ил]окси}фенил)-N'-(4-фторфенил)циклопропан-1,1-дикарбоксамид, и соединения формулы (II), которое представляет собой 4-[3-хлор-4-(циклопропиламино-карбонил)аминофенокси]-7-метокси-6-хинолинкарбоксамид.

2. Противоопухолевое лекарственное средство для одновременного или раздельного введения соединения или его фармацевтически приемлемой соли формулы (I): представляющего собой N-(2-фтор-4-{[2-({[4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил]карбонил}амино)пиридин-4-ил]окси}фенил)-N'-(4-фторфенил)циклопропан-1,1-дикарбоксамид, и соединения формулы (II), которое представляет собой 4-[3-хлор-4-(циклопропиламино-карбонил)аминофенокси]-7-метокси-6-хинолинкарбоксамид.

3. Противоопухолевое лекарственное средство, содержащее соединение или его фармацевтически приемлемую соль формулы (I): представляющее собой N-(2-фтор-4-{[2-({[4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил]карбонил}амино)пиридин-4-ил]окси}фенил)-N'-(4-фторфенил)циклопропан-1,1-дикарбоксамид, и соединение формулы (II), которое представляет собой 4-[3-хлор-4-(циклопропиламино-карбонил)аминофенокси]-7-метокси-6-хинолинкарбоксамид.

4. Противоопухолевая фармацевтическая композиция, содержащая соединение или его фармацевтически приемлемую соль формулы (I), представляющего собой N-(2-фтор-4-{[2-({[4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил]карбонил}амино)пиридин-4-ил]окси}фенил)-N'-(4-фторфенил)циклопропан-1,1-дикарбоксамид: и соединение формулы (II), которое представляет собой 4-[3-хлор-4-(циклопропиламино-карбонил)аминофенокси]-7-метокси-6-хинолинкарбоксамид .

5. Способ лечения опухоли, при котором вводят в комбинации соединение или его фармацевтически приемлемую соль формулы (I): представляющее собой N-(2-фтор-4-{[2-({[4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил]карбонил}амино)пиридин-4-ил]окси}фенил)-N'-(4-фторфенил)циклопропан-1,1-дикарбоксамид, и соединение формулы (II), ,которое представляет собой 4-[3-хлор-4-(циклопропиламино-карбонил)аминофенокси]-7-метокси-6-хинолинкарбоксамид.