Способ получения пробиотиков и способы их применения

Способ получения пробиотиков и способы их применения

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Перекрестная ссылка на родственные заявки

Настоящая заявка испрашивает приоритет по дате подачи предварительной заявки США №61/821,990, которая была подана 10 мая 2013 года. Применительно к любой заявке США, которая может истребовать приоритет на основании предварительной заявки США №61/821,990, содержание этой ранее поданной заявки включено посредством ссылки в полном объеме.

Область техники

Настоящее изобретение относится к композициям, содержащим пробиотические организмы и способы введения этих композиций беременным и кормящим субъектам. Эти способы полезны для лечения инфекции у потомства таких субъектов.

Уровень техники

Несмотря на современные клинические достижения, инфекции продолжают вызывать значительную неонатальную заболеваемость и смертность, особенно у небольших недоношенных новорожденных. По данным Всемирной организации здравоохранения, инфекции, в том числе сепсис, пневмония, столбняк и диарея, составляют примерно 36% от 3,3 млн. смертей новорожденных по всему миру в год. Неонатальная иммунная система является функционально незрелой. Диагностика стиха инфекций у новорожденных может быть сложной, потому что симптомы могут быть слабыми и неспецифическими. Хотя многие инфекции отвечают на антибиотики, задержка в антибиотикотерапии может привести к быстрому прогрессированию инфекции и развитию очень серьезных заболеваний, таких как сепсис новорожденных. Нелеченный неонатальный сепсис - неизменно фатальный. Смертность от сепсиса у детей, получавших антибиотики, находится в пределах от 5% до 60% с наиболее высокими показателями в странах с наименьшим уровнем дохода. Существует постоянная потребность в новых стратегий и средствах для лечения и профилактики инфекций у младенцев.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к способам лечения микробной инфекиии у ребенка кормящей матери, причем способ включает введение эффективного количества композиции, содержащей пищевой продукт для матери, в котором пищевой продукт был ферментирован посредством пробиотической бактерии, Lactobacillus paracasei СВА L74, регистрационный номер в международном депозитарии LMG Р-24778. Бактерия может быть нереплицируемой. Композиция может вводиться внутриутробно, постнатально или внутриутробно и постнатально вплоть до того момента, как младенца отнимают от груди. Способ может дополнительно включать в себя стадию идентификации младенца, нуждающегося в лечении. Микроорганизм может быть Salmonella typhimurium, Cronobacter sakazakii, Escherichia coli, Listeria monocytogenes, Streptococcus pneumoniae Neisseria meningitidis или ротавирусом. Ферментированный пищевой продукт может быть молочным или зерновым продуктом. Также обеспечиваются способы предотвращения или снижения тяжести микробной инфекции у ребенка кормящей матери, причем способ включает введение эффективного количества композиции, содержащей пищевой продукт для матери, в котором пищевой продукт был ферментированным посредством пробиотической бактерии, Lactobacillus paracasei СВА L74, регистрационный номер в международном депозитарии LMG Р-24778. Бактерия может быть нереплицируемой.

Краткое описание чертежей

Эти и другие признаки и преимущества настоящего изобретения будут более полно раскрыты, или станут очевидными посредством нижеследующего подробного описания предпочтительного варианта осуществления изобретения, который должен рассматриваться совместно с прилагаемыми чертежами, на которых одинаковые номера относятся к одинаковым частям и дополнительно где:

Фиг. 1 представляет собой график, изображающий результаты анализа эффекта введения матери риса, ферментированного L. paracasei, штамм СВА L74, на выживаемость потомства, инфицированного Cronobacter sakazakii.

Фиг. 2 представляет собой график, изображающий результаты анализа эффекта введения матери риса, ферментированного L. paracasei, штамм СВА L74, на выживаемость потомства, инфицированного Cronobacter sakazakii.

Фиг. 3 представляет собой график, изображающий результаты анализа эффекта введения матери молока, ферментированного L. paracasei СВА L74, на выживаемость потомства, инфицированного Salmonella typhimurium FB62.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение частично основано на открытии изобретателей о том, что введение пищи, ферментированной посредством пробиотического организма Lactobacillus paracasei, штамма СВА L74, беременным и кормящим животным может уменьшить или смягчить серьезность микробных инфекций у их потомства. Более конкретно, авторы изобретения обнаружили, что введение риса, ферментированного L. paracasei, штамм СВА L74 беременным и кормящим матерям приводило к увеличению процента выживаемости их новорожденных после инфицирования Cronobacter sakazakii. Аналогичным образом, изобретатели также обнаружили, что введение молока, ферментированного L. paracasei, штамм СВА L74 беременным и кормящим матерям приводит к увеличенному проценту выживания их новорожденных после инфицирования Salmonella typhimurium FB62. Таким образом, изобретение представляет способы для уменьшения или ослабления тяжести или профилактики микробных инфекций в организмах новорожденных посредством введения композиции, содержащей пищевые продукты, ферментированные L. paracasei, штамм СВА L74, их матерям. Композиции могут быть введены матери во время беременности, то есть внутриутробно. Альтернативно или в дополнение, эти композиции могут быть введены матери после рождения ребенка, то есть постнатально. В некоторых вариантах осуществления L. paracasei, штамм СВА L74 является нереплицируемым.

Lactobacillus paracasei, штамм СВА L74 изобретатели выделяли и депонировали в соответствии с Будапештским Договором о международном признании депонирования микроорганизмов для целей патентной процедуры 9 сентября 2008 года в Бельгийской координационной коллекции микроорганизмов (ВССМ) Laboratorium voor Microbiologic (LMG), Ghent, Belgium. Регистрационный номер выданный международным органом по депонированию является LMG Р-24778. Для удобства прочтения, мы не будем повторять фразу "регистрационный номер LMG Р-24778" в каждом случае. Следует понимать, что когда мы имеем в виду L. paracasei, штамм СВА L74, мы ссылаемся на депонированный штамм, имеющий регистрационный номер LMG Р-24778.

В то время как по нашему мнению мы понимаем определенные события, которые происходят при введении композиций, содержащих или произведенных с помощью ферментации с L. paracasei СВА L74, композиции по настоящему изобретению не ограничиваются теми композициями, которые работают посредством воздействия какого-либо конкретного клеточного механизма.

Композиции

L. paracasei СВА L74

Композиции по настоящему изобретению могут включать пробиотическкн организм L. paracasei СВА L74. Всемирная организация здравоохранения определила пробиотики как: "Живые микроорганизмы, которые при введении в адекватных количествах обеспечивают лечебный эффект хозяину". В некоторых вариантах осуществления L. paracasei СВА L74 могут быть подвергаться обработке, которая делает их нереплицируемыми, например, посредством воздействия тепла, γ-облучения, или УФ-облучения. Нереплицируемая L. paracasei СВА L74 может быть мертвой клеткой или живой клеткой, которая оказалась неспособной к клеточному делению. Нереплицируемая L. paracasei СВА L74 может быть интактной клеткой или клеткой, которая подверглась частичному или полному лизису. В некоторых вариантах осуществления нереплицируемые клетки могут включать смесь интактных и лизированных клеток.

Продукты питания

Композиции по изобретению могут включать физиологически приемлемый носитель. Физиологический носитель может быть пищевым продуктом или фармацевтическим носителем. Мы используем термины "физиологически приемлемые" (или "фармакологически приемлемые") для обозначения молекулярных структур и композиций, которые не продуцируют нежелательные, аллергические или другие нежелательные реакции при введении животному или человеку, в зависимости от конкретного случая. Таким образом, композиции по настоящему изобретению включают пищевые продукты, ферментированные посредством пробиотического организма, L. paracasei СВА L74. Пищевой продукт может включать в себя клетки L. paracasei СВА L74, либо живые, либо нереплицируемые. В некоторых вариантах осуществления пищевой продукт может быть обработан, чтобы удалить все или практически все клетки L. paracasei СВА L74. Любой пищевой продукт, который подлежит ферментации L. paracasei СВА L74, может быть использован. Пищевым продуктом может быть молочный продукт, например, молоко или продукт на основе молока. Примеры источников молока включают, без ограничения, крупный рогатый скот, овец, коз, яков, буйволов, лошадей, ослов, оленей и верблюдов. Независимо от источника, молоко или молочные продукты могут быть в любой форме, подходящей для ферментации посредством L. paracasei СВА L74. Например, молоко может быть цельным молоком или молоком, которое было обработано, чтобы удалить некоторую часть или весь молочный жир, например, 2% молоко, 1% молоко или обезжиренное молоко. Альтернативно или в дополнение, молоко может быть предварительно пастеризовано и гомогенизировано или высушено и восстановлено, концентрированно или сгущено. Также могут быть использованы фракции молочных продуктов, включая казеин, белок молочной сыворотки или лактозу. В некоторых вариантах осуществления молочный продукт может состоять от примерно 1% до примерно 30% порошка восстановленного обезжиренного молока, например, примерно 2%, примерно 5%, примерно 7%, примерно 9%, примерно 10%, примерно 12%, примерно 15%, примерно 20%, примерно 25%, примерно 30% восстановленного сухого обезжиренного молока. Перед ферментацией молочный продукт может быть комбинирован с одним или более из следующего: а) углеводом (например, дисахаридом, таким как декстроза или крахмал; b) липидами; в) витаминами г) минералами. Например, сухое обезжиренное молоко может быть комбинировано с декстрозой до примерно 2%, например, примерно 0,25%, примерно 0,50%, примерно 0,75%, примерно 1,0%, примерно 1,5% или примерно 2,0%.

Пищевой продукт может быть зерновым продуктом, например, рисом, кукурузой, овсом, сорго или просом. В некоторых вариантах осуществления зерновой продукт может быть пшеницей, ячменем, рожью или тритикале. Зерновой продукт может быть из цельного зерна или измельченным в муку. Пищевой продукт может быть одним видом зерновых или смесью двух или нескольких видов зерновых, например, овсяной муки плюс рисовой муки. Зерновые продукты могут быть качества и типа, подходящего для потребления человеком или могут быть продуктами, подходящими для потребления домашними животными. Как правило, продукт из злаков гидратируют перед ферментацией. Концентрация хлопьев может варьироваться, но полезные диапазоны включают от примерно 5% до примерно 50% масса/объем, например, примерно 8% масса/объем, примерно 10% масса/объем, примерно 12% масса/объем, примерно 15% масса/объем, примерно 18% масса/объем, примерно 20% масса/объем, примерно 22% масса/объем, примерно 25% масса/объем, примерно 30% масса/объем, примерно 35% масса/объем, примерно 40% веса/объем, примерно 45% масса/объем или примерно 50% масса/объем. Примерные концентрации включают 15% масса/объем риса или смесь 18,5% масса/объем овсяной муки плюс 5% масса/объем соложеной ячменной муки. рН гидратированных зерновых можно регулировать с помощью любой кислоты, подходящей для усвоения. Кислота может быть, например, органической кислотной. Полезные органические кислоты включают уксусную кислоту, лимонную кислоту, молочную кислоту, адипиновую кислоту, яблочную кислоту и винную кислоту. Любая комбинация из двух или нескольких кислот может быть использована. В некоторых вариантах осуществления значение рН может быть отрегулировано до 4,0 с использованием лимонной кислоты.

Пищевой продукт также может быть растительным или фруктовым продуктом, например, соком, пюре, концентратом, пастой, соусом, соленьем или кетчупом. Примерные овощи и фрукты включают без ограничения, кабачки, например, цукини, желтый сквош, тыкву, тыкву крупноплодную; картофель, спаржу, брокколи, брюссельскую капусту, бобы, например, зеленые бобы, восковую фасоль, фасоль, конские бобы, соевые бобы, капусту, морковь, цветную капусту, огурцы, кольраби, лук-порей, зеленый лук, лук, сахарный горох, английский горох, перец, репу, брюкву, помидоры, яблоки, груши, персики, сливы, клубнику, малину, ежевику, чернику, бруснику, бойзенову ягоду, крыжовник, виноград, смородину, апельсины, лимоны, грейпфруты, бананы, манго, киви и карамболу.

Пищевой продукт также может быть "молоком", изготовленным из орехов или бобовых, например, соевое молоко или миндальное молоко.

Рассматриваются также пищевые продукты, содержащие белки животного происхождения, например, мясо, например, колбасы, обезвоженное мясо, рыба и сушеные рыбные продукты.

Независимо от типа пищевого продукта, который используется, продукт комбинируется с L. paracasei СВА L74 и инкубируется при температуре и в течение времени, достаточного для того, чтобы произошла ферментация. Может быть использован любой стандартный способ ферментации, известный в данной области техники. Конкретные условия ферментации будут варьироваться в зависимости от многих факторов, в том числе, например, от типа пищевого продукта, концентрации пищевого продукта, оборудования, которое используется, объема образца, начальной концентрации инокулята L. paracasei СВА L74, наличия, если таковой имеется, дополнительного инокулята, органолептических свойств ферментированной пищи, и предназначения использования ферментированной пищи.

Как оборудование, так и субстрат (т.е. пищевой продукт, который должен быть ферментирован) стерилизуют перед посевом L. paracasei СВА L74, чтобы уменьшить уровень или удалить жизнеспособные бактерии и/или грибки и/или инфекционные вирусы. Оборудование может быть стерилизовано с использованием стандартных методов или в соответствии с инструкциями изготовителя. Выбор конкретного метода для стерилизации субстрата будет зависеть, частично, от стабильности субстрата к способу стерилизации. Например, субстрат может быть стерилизован паром под давлением, например в автоклаве, посредством повторяющихся циклов нагревания и охлаждения (например, тиндализацией) посредством воздействия высоких давлений (например, паскализацией), ультрафильтрацией или посредством излучения (например, воздействием гамма-, рентгеновского излучения, электронного пучка и/или ультра-фиолетового излучения (длина волны от 10 нм до 320 нм, например, от 50 нм до 320 нм, от 100 нм до 320 нм, от 150 нм до 320 нм, от 180 нм до 320 нм или от 200 нм до 300 нм). Аликвоты субстрата могут быть отоюраны после обработки и высеваться на подходящей среде для подтверждения отсутствия бактериальных и/или грибковых контаминантов. Если субстрат стерилизуют при высоких температурах, его следует охладить до по меньшей мере 37°C перед инокуляцией L. paracasei СВА L74.

Субстрат может быть инокулирован L. paracasei СВА L74 в соответствии со стандартными методами, например, из свежей жидкой культуры или лиофилизированной культуры, которую ресуспендируют в водной среде в течение короткого времени перед посевом. В целом, L. paracasei СВА L74 добавляют в концентрации от примерно 0,5×10⁶ до примерно 1×10⁶ КОЕ/мл субстрата, например, примерно 1×10⁶ КОЕ/мл, примерно 2×10⁶ КОЕ/мл, примерно 5×10⁶ КОЕ/мл, 7×10⁶ КОЕ/мл 8×10⁶ КОЕ/мл. Культуру необходимо достаточно перемешивать для получения относительно равномерного распределения бактерий и субстрата, но не чрезмерно, так как L. paracasei СВА L74 является анаэробной бактерией. Например, пять литров культуры можно перемешивать при примерно 150 оборотов в минуту. Температура ферментации, как правило, составляет 37°C. Различные параметры, например, рН, парциальное давление О₂, скорость мешалки, температуру, перемешивание газа, уровень пены и концентрацию субстрата можно контролировать во время ферментации и соответствующим образом корректировать. Рост L. paracasei СВА L74 можно контролировать с помощью стандартных микробиологических методов. Ферментацию проводят до тех пор, пока концентрация L. paracasei СВА L74 не станет примерно между примерно 10⁸/мл и примерно 10⁹/мл. В зависимости от субстрата и других условий, эта концентрация может быть достигнута через от около 10 до около 30 часов после инокуляции, например, через примерно 12 часов, примерно 15 часов, примерно 18 часов, примерно 24 часов, примерно 30 часов.

Образцы субстрата можно анализировать до, во время и после ферментации для обеспечения качества с использованием стандартных микробиологических методов: Примерные способы включают, но не ограничиваются этим, рост на агаре Рогоза для L. paracasei СВА L74, рост посевом на чашках Петри для определение количества микроорганизмов (PCA) на аэробы, рост на агаре Мак-Конки для бактерий группы кишечной палочки, рост на усиленном клостридиальном агаре (RCM) для клостридий. В дополнение к подсчету колоний, можно наблюдать морфологию колонии по сравнению с контрольными образцами.

В некоторых вариантах осуществления может быть добавлен дополнительный инокулят вместе с L. paracasei СВА L74, чтобы помочь инициировать ферментацию. Полезные дополнительные посевные материалы для ферментации молочных продуктов включают в себя, например, без ограничения, Streptococcus thermophilus, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus salivarious, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus casei, Lactobacillus lactis, Lactobacillus delbrueckii, subsp. Bulgaricus, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus brevis или Leuconostoc mesenteroides. В общем, концентрация дополнительного инокулята будет ниже, чем у L. paracasei СВА L74, например, примерно 1×10⁴/мл ×10⁵/мл. Конечная концентрация S. thermophilus может варьироваться от примерно 0,5×10⁸/мл до примерно 2,5×10⁸/мл.

После того, как были достигнуты подходящие концентрации L. paracasei СВА L74, ферментированный пищевой продукт может быть дополнительно обработан для использования. В некоторых вариантах осуществления ферментированный пищевой продукт можно фракционировать, чтобы удалить все или по существу все клетки L. paracasei СВА L74. В некоторых вариантах осуществления значение рН ферментированного пищевого продукта можно регулировать, например, от примерно 3,0 до близкого к нейтральному, например, 6,5, посредством добавления NaOH или КОН. В некоторых вариантах осуществления ферментированный пищевой продукт можно высушить. Полученный ферментированный продукт питания может быть высушен любым способом, известным в данной области техники, который не приведет к потери иммуномодулирующих свойств ферментированной пищи. Примеры способов сушки включают сушку распылением, сублимационную сушку, например лиофилизацию или барабанную сушку. Конечное содержание воды в ферментированном пищевом продукте может изменяться, но может быть от примерно 1% до примерно 10% или более. В некоторых вариантах осуществления, процесс сушки может приводить L. paracasei СВА L74 в нереплицируемое состояние.

Высушенные ферментированные продукты питания могут быть гидратированы перед использованием. В зависимости от количества жидкости, используемой для гидратации, ферментированные пищевые продукты могут содержать; эквивалент примерно 10² и 10¹² КОЕ/мл L. paracasei СВА L74. Высушенный L. paracasei СВА L74 не образует колоний, поэтому понятно, что это количество рассчитано на основании количества живых бактерий, которые присутствовали в ферментированных пищевых продуктов перед стадией сушки. В некоторых вариантах осуществления ферментированные пищевые продукты могут включать эквивалент от около 10⁷ до около 10¹² КОЕ/г, например, примерно 5×10⁷ КОЕ/г, примерно 1×10⁸ КОЕ/г, примерно 5×10⁸ КОЕ/г, примерно 1×10⁹ КОЕ/г, примерно 5×10⁹ КОЕ/г, примерно 1×10¹⁰ КОЕ/г, примерно 5×10¹⁰ КОЕ/г, примерно 1×10¹¹ КОЕ/г, примерно 5×10¹¹ КОЕ/г сухой массы.

Два или несколько ферментированных продуктов, полученных посредством способов по изобретению могут быть объединены перед введением. Например, ферментированные кисломолочные продукты могут быть объединены с ферментированными зерновыми продуктами. В качестве альтернативы, ферментированный пищевой продукт может быть объединен с другими пищевыми продуктами, например, неферментированными пищевыми продуктами или пищевыми продуктами, ферментированными с использованием других бактериальных штаммов. Любая комбинация может быть использована при условии, что сохраняется воздействие на глиадиновые пептиды ферментированного пищевого продукта. Примерные продукты питания включают в себя, без ограничения, молочные продукты, например молоко, йогурт, творог, сыр и сырные продукты на основе ферментированного молока, кисломолочные продукты, продукты, основанные на кисломолочном брожении, продукты, основанные на порошковом молоке, продукты для детей, протертая пища для детей на основе молока, мороженое, холодный десерт, пудинги, супы, соусы, пюре или заливка, пищевые рецептуры для пожилых людей; крупяные продукты, например, паблум, протертая пища для детей на зерновой основе, овсянка, фарина, манная крупа, полента, макаронные изделия, печенье, крекеры, энергетические батончики; растительные продукты, например, пюре, протертая пища для детей на основе овощей, марин генные овощи, включая огурцы, капусту, морковь, фасоль, сладкий перец или релиши; фруктовые продукты, например, протертая пища для детей на основе фруктов, томатные продукты, пюре, соусы, пасты, кетчупы, фруктовые пюре; или продукты на основе белков, например, бобовые, сосиски, колбасы, хот-доги или протертое мясо. В некоторых вариантах осуществления ферментированный пищевой продукт может быть комбинирован с кормами для питомцев или кормами для животных.

Фармацевтические композиции

Композиции, описанные в настоящем изобретении, могут быть объединены с фармацевтически приемлемым носителем. Термин "фармацевтически приемлемый носитель", как он использован в настоящем изобретении, включает все без исключения растворители, дисперсионные среды, покрытия, антибактериальные агенты, изотонические агенты и агенты, задерживающие всасывание, буферы, вспомогательные вещества, связующие вещества, смазывающие вещества, гели, поверхностно-активные вещества и т.п., которые могут быть использованы в качестве среды для фармацевтически приемлемых веществ.

Таким образом, настоящее изобретение также включает фармацевтические композиции, которые содержат в качестве активного ингредиента L. paracasei СВА L74 или один или несколько метаболитов, продуцируемых L. paracasei СВА L74, описанных в настоящем изобретении, в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями. В некоторых вариантах осуществления L. paracasei СВА L74 может быть стерилизовано с использованием обычных методик стерилизации, до или после того, как осуществиться объединение с фармацевтически приемлемым носителем. При изготовлении композиций по данному изобретению L. paracasei СВА L74 или один или нескольких метаболитов, продуцируемых L. paracasei СВА L74, обычно смешивают с вспомогательным веществом, разбавляют вспомогательным веществом или заключают в таком носителе в форме, например, капсулы, таблетки, саше, бумаги или в другого контейнера. Когда вспомогательное вещество служит в качестве разбавителя, оно может быть твердым, полутвердым или жидким материалом, (например, физиологическим раствором), которое действует как растворитель, носитель или среда для активного ингредиента. Таким образом, композиции могут быть в форме таблеток, пилюль, порошков, лепешек, облаток, эликсиров, суспензий, эмульсий, растворов сиропов, аэрозолей (в виде твердого вещества или в жидкой среде), мазей, мягких и твердых желатиновых капсул, суппозиториев, стерильных растворов для инъекций и стерильных упакованных порошков. Как известно в данной области техники, тип разбавителя может варьироваться в зависимости от предполагаемого пути введения. Полученные композиции могут включать дополнительные вещества, такие как консерванты. Вспомогательное вещество или носитель выбирают на основании режима и способа введения. Подходящие фармацевтические носители, а также фармацевтические принадлежности для использования в фармацевтических композициях, описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences (Е.W. Martin), хорошо известномй основополагающем тексте в этой области техники, и в USP/NF (Фармакопея США и Национальный формуляр). Некоторые примеры подходящих вспомогательных веществ включают лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, крахмалы, аравийскую камедь, фосфат кальция, альгинаты, трагакант, желатин, силикат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, целлюлозу, воду, сироп и метилцеллюлозу. Композиции могут дополнительно включать: смазывающие агенты, такие как тальк, стеарат магния и минеральное масло; смачивающие агенты; эмульгирующие и суспендирующие агенты; консерванты, такие как метил- и пропилгидроксибензоаты; подсластители и ароматизаторы. Фармацевтические композиции могут быть приготовлены таким образом, чтобы обеспечить быстрое, длительное или замедленное высвобождение активного ингредиента после введения пациенту с использованием процедур, известных в данной области техники.

Фармацевтически приемлемые композиции для использования в способах настоящего изобретения, в том числе такие, в которых L. paracasei СВА L74 или один или несколько метаболитов, продуцируемых L. paracasei СВА L74, захватываются в коллоид для пероральной доставки, могут быть получены в соответствии с стандартными методиками. L. paracasei СВА L74 или один или несколько метаболитов, продуцируемых L. paracasei СВА L74, могут быть высушены и компактизированы посредством дробления или измельчения в порошок и заключением в капсулу для пероральнохо введения. В некоторых вариантах осуществления L. paracasei СВА L74 или один или несколько метаболитов, продуцируемых L. paracasei СВА L74, могут быть скомбинированы с один или несколько вспомогательными веществами, например, разрыхлителем, наполнителем, скользящим веществом или консервантом. Подходящие капсулы включают как твердые капсулы, так мягкие капсулы. Любой коллоид на основе липидов или на основе полимера может быть использован для формирования капсулы. Примерные полимеры, используемые для коллоидных препаратов, включают желатин, полисахариды растений или их производные, такие как каррагинаны и модифицированные формы крахмала и целлюлозы, например, гипромеллозу. При необходимости другие ингредиенты могут быть добавлены в раствор гелеобразующего агента, например пластификаторы, такие как глицерин и/или сорбит для уменьшения жесткости капсулы, красители, консерванты, разрыхлители, лубриканты и обработка поверхности. В некоторых вариантах осуществления капсула не содержит желатин. В других вариантах осуществления капсула не содержит растительных полисахаридов или их производных.

Независимо от их первоначального источника или способа, которым они получены, в L. paracasei СВА L74 или один или несколько метаболитов, продуцируемых L. paracasei СВА L74, могут быть сформулированы в соответствии с их использованием. Эти композиции могут быть получены способом, хорошо известным в фармацевтической области техники, и могут быть введены различными способами в зависимости от того, требуется ли местное или системное лечение, и от области, подлежащей обработке Введение может быть пероральным или местным (включая офтальмологические и на слизистые оболочки, включая интраназальное, вагинальное и ректальное введение). В некоторых вариантах осуществления введение может быть через легкие (например, посредством ингаляции или инсуффляции порошков или аэрозолей, в том числе с помощью небулайзера; интратрахеальное, интраназальное, эпидермальное и трансдермальное) или интраокулярное. Методы для интраокулярной доставки могут включать в себя местное введение (глазные капли), субконъюнктивальную, периокулярную или интравитреальную инъекцию или введение посредством баллонного катетера или офтальмологических вставок, помещаемых хирургическим путем в конъюнктивальный мешок. Парентеральное введение включает внутривенную, внутриартериальную, внутрибрюшинную, подкожную или внутримышечную инъекцию или инфузию; или внутричерепное, например, интратекальное или интравентрикулярное введение. Парентеральное введение может быть в виде единственного болюса, или может быть, например, введено посредством непрерывного перфузионного насоса. Фармацевтические композиции и лекарственные формы для местного применения могут включать трансдермальные пластыри, мази, лосьоны, кремы, гели, капли, суппозитории, спреи, жидкости, порошки и тому подобное. Обычные фармацевтические носители, водные, порошковые или масляные основы, загустители и т.п. могут быть необходимыми или желательными.

Композиции могут быть приготовлены в виде единичной дозированной формы, причем каждая доза содержит, например, от около 0,005 мг до около 2000 мг L. paracasei СВА L74 или одного или нескольких метаболитов, продуцируемых L. paracasei СВА L74, в суточной дозе.

Термин "единичные дозированные формы" относится к физически дискретным единицам, пригодным в качестве единичных доз для человека и других млекопитающих, причем каждая единица содержит заданное количество активного материала, рассчитанное на получение желаемого терапевтического эффекта, в сочетании с подходящим фармацевтическим вспомогательным веществом. Для получения твердых композиций, таких как таблетки, основной активный ингредиент смешивают с фармацевтическим вспомогательным веществом с образованием твердой композиции до придания ей лекарственной формы, содержащей гомогенную смесь соединения по настоящему изобретению. Когда говорится об этих композициях, как о гомогенных, активный ингредиент обычно равномерно распределяют по всей композиции до придания ей лекарственной формы, так что композицию можно легко разделить на равно эффективные единичные дозированные формы, такие как таблетки, пилюли и капсулы. Эту твердую композицию до придания ей лекарственной формы затем делят единичные дозированные формы описанного выше типа, содержащие от, например, 0,005 мг до около 1000 мг L. paracasei СВА L74 или одного или нескольких метаболитов, продуцируемых L. paracasei СВА L74 по настоящему изобретению.

Композиции могут быть приготовлены в виде единичной дозированной формы, причем каждая доза содержит, например, от примерно 0,1 мг до примерно 50 мг, от примерно 0,1 мг до примерно 40 мг, от примерно 0,1 мг до примерно 20 мг, от примерно 0,1 мг до примерно 10 мг, от примерно 0,2 мг до примерно 20 мг, от примерно 0,3 мг до примерно 15 мг, от примерно 0,4 мг до примерно 10 мг, от примерно 0,5 мг до примерно 1 мг; от примерно 0,5 мг до примерно 100 мг, от примерно 0,5 мг до примерно 50 мг, от примерно 0,5 мг до примерно 30 мг, от примерно 0,5 мг до примерно 20 мг, от примерно 0,5 мг до примерно 10 мг, от примерно 0,5 мг до примерно 5 мг; от примерно 1 мг до примерно из 50 мг, от примерно 1 мг до примерно 30 мг, от примерно 1 мг до примерно 20 мг, от примерно 1 мг до примерно 10 мг, от примерно 1 мг до примерно 5 мг; от примерно 5 мг до примерно 50 мг, от примерно 5 мг до примерно 20 мг, от примерно 5 мг до примерно 10 мг; от примерно 10 мг до примерно 100 мг, от примерно 20 мг до примерно 200 мг, от примерно 30 мг до примерно 150 мг, от примерно 40 мг до примерно 100 мг, от примерно 50 мг до примерно 100 мг активного ингредиента.

В некоторых вариантах осуществления таблетки или пилюли по настоящему изобретению могут быть покрыты или иным образом компаундированы, чтобы обеспечить лекарственную форму, предоставляющую преимущества пролонгированного действия. Например, таблетка или пилюля может содержать внутренний дозированный и внешний дозированный компонент, причем последний в виде оболочки над первым. Два компонента могут быть разделены кишечнорастворимым слоем, который обеспечивает устойчивость к дезинтеграции в желудке и позволяет внутреннему компоненту проходить неповрежденным в двенадцатиперстную кишку или задержать в высвобождение. Множество материалов может быть использовано для таких кишечнорастворимых слоев или покрытий, причем такие материалы включают ряд полимерных кислот и смесей полимерных кислот с такими материалами, как шеллак, цетиловый спирт и ацетат целлюлозы.

Жидкие формы, в которые композиции по настоящему изобретению могут быть включены для перорального введения или путем инъекции, включают водные растворы, соответствующим образом ароматизированные сиропы, водные или масляные суспензии и ароматизированные эмульсии с пищевыми маслами, такими как хлопковое масло, кунжутное масло, кокосовое масло или арахисовое масло, а также эликсиры и подобные фармацевтические носители.

Пропорция или концентрация композиции по изобретению в фармацевтической композиции может варьироваться в зависимости от целого ряда факторов, включая дозировки, химические характеристики (например, гидрофобность) и способ введения. Например, L. paracasei СВА L74 или один или несколько метаболитов, продуцируемых L. paracasei СВА L74, согласно изобретению могут обеспечиваться в виде капсулы, содержащей от примерно 0,005 мг грамм до примерно 1000 мг для перорального введения.

В некоторых вариантах осуществления композиции могут включать в себя ферментаты L. paracasei СВА L74, из которых все или по существу все из клеток L. paracasei СВА L74 были удалены. Способы отделения клеток от питательной среды хорошо известны в данной области техники и могут опираться на физические методы, например, центрифугирование, для получения клеточной массы и культурального супернатанта, фильтрацию, ультрафильтрацию, тангенциальную проточную фильтрацию, простую фильтрацию или обратного осмоса. Альтернативно или в дополнение, способ разделения может быть основан на взаимодействии с лигандом и включает, например, антитело, которое специфически связывается с L. paracasei СВА L74. Антитело может быть соединено с твердой подложкой, такой как магнитный шарик.

Композиции включают один или несколько метаболитов L. paracasei СВА L74, то есть любое вещество, продуцируемое L. paracasei СВА L74. Метаболит может быть кодироваться с помощью одного или несколько генов, или он может образовываться с помощью ферментативной активности одного или нескольких генных продуктов. Метаболиты включают, например, низкомолекулярные вещества, например, аминокислоты, нуклеозиды, нуклеотиды, а также более крупные полимерные структуры, такие как полипептиды, углеводы, нуклеиновые кислоты, липиды и протеогликаны. Метаболит может быть первичным метаболитом, например, метаболитом, принимающим непосредственное участие в нормальной функции клеток, или вторичным метаболитом, например, метаболитом, обычно, не требующимся для основных клеточных функций. Метаболит может также включать любое метаболическое промежуточное соединение, генерируемое в процессе синтеза первичного или вторичного метаболита. Промежуточные вещества могут включать, но не ограничиваются этим промежуточные вещества Эмбден-Мейергофа, пентозофосфатного (пентозо-Ф) путей, пути Энтнер-Дудорова, цикла лимонной кислоты, и биосинтеза аминокислот.

Примеры первичных метаболитов включают, без ограничения, спирты, например, этанол, метанол, бутанол; аминокислоты, например, лизин, аргинин, орнитин, гистидин, цитруллин, изолейцин, аланин, валин, лейцин, глицин, треонин, серии, пролин, фенилаланин, тирозин, триптофан, цистеин, цистин, метионин, глутаминовую кислоту, аспарагиновую кислоту, глутамин и аспарагин; нуклеотиды, например, 5'-гуаниловую кислоту; антиоксиданты, например, изоаскорбиновую кислоту; органические кислоты, например, уксусную кислоту, молочную кислоту, лимонную кислоту; витамины, например, витамин В12; сахара, жирные кислоты.

Метаболит также может быть вторичным метаболитом. Вторичные метаболиты, как правило, метаболиты, которые не требуются для основных клеточных функций. Вторичные метаболиты могут варьироваться в широких пределах; примерные вторичные метаболиты включают антибиотики, гормоны, флавоноиды, терпеноиды, алкалоиды, фенилпропаноиды, фенильные производные, производные гексанола, кумарины, стильбены, циангидрины, глюкозинолаты, стерины и сапонины.

Лактобактерии обычно производят следующие метаболиты в процессе ферментации молочных продуктов: молочную кислоту/лактат, ацетат, этанол, формиат, ацетальдегид, α-ацетолактат, ацетоин, диацетил и 2,3-бутиленгликоль (бутан диол) в процессе ферментации молочных продуктов. Ферментацией может быть любой процесс, 6 котором микроорганизм вызывает разложение или способствует разложению сложного органического вещества на более простые вещества.

Метаболит L. paracasei СВА L74 может соде