Питательная среда для выделения и культивирования бифидобактерий

Питательная среда для выделения и культивирования бифидобактерий

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к техниг ческой микробиологии, молочной промышленности , медицине и касается состава питательной среды для выделения и культивирования бифидобактерий в молочных продуктах лечебного и диетического питания, фекалиях и других субстратах. Цель изобретения - повьшение качества среды за счет обеспечения стабильности ростовых свойств. Предлагается питательная среда, содержащая, мас.%: пептон 0,9-1,0; лактоза 0,9-1,0; кукурузный экстракт 0,5-1,0; t -дистин соляноткислый 0,01-0,02; натрий лимонно-кислый трехзамещенный 0,5-0,8; магний серно-кислый 7-водный 0,010 ,02; натрий фосфорно-кислый двухс $ замещенный 12-водный 0,05-0,1; калий фосфорно-кислый однрзамещенный 0,15-0,2; агар-агар 0,1-2,0; дистиллированная вода - остальное. Содержание живых бактерий в 1 мл через 48 и 16 ч культивирования составляет для В. bifidunt , В. adolescentis МС42-10 -10. 2 табл. . IND 00 ю

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСНОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

llO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3794941/30-13 (22) 28,09.84 (46) 23.11.86. Бюл, 11 43 (71) Всесоюзный научно-Hccstepoeaтельский институт молочной промьппленности (72) М. Б. Сундукова Е. А, Хорькова, В. Ф. Семенихина, В. И, Ганина, M. П, Халенева, В, В. Поспелова и Н. Г, Рахимова (53) 577.15(088.8) (56) Методические рекомендации по бактериологической диагностике дисбактериоза кишечника, - М.: МЗ РСФСР, 1977.

Гончарова Г. И. К методике культивирования В. bifidum, - Лабораторное дело, 1968, 9 2, с. 100-102, (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ

И КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БИФИДОБАКТЕРИЙ (57) Изобретение относится к техни-, ческой микробиологии, молочной промышленности, медицине и касается

„,Я0„„1271872 А 1 (Ю 4 С.12 N 1/20 (С 12 N 1/20, C 12 R 1/01) . состава питательной среды для выделения и культивирования бифидобактерий в молочных продуктах лечебного и диетического питания, фекалиях и других субстратах. Цель изобретения — повышение качества среды за счет обеспечения стабильности ростовых свойств. Предлагается питательная среда, содержащая, мас.X: пелтон 0,9-1,0; лактоза 0,9-1,0; кукурузный экстракт 0,5-1,0; 1, -цистин соляно-.кислый 0„01-0,02; натрий лимонно-кислый трехзамещенный 0,5-0,8; магний серно-кислый 7-водный 0 010,02; натрий фосфорно-кислый двухзамещенный 12-водный 0,05-0,1; калий фосфорно-кислый однозамещенный

0,15-0,2; агар-агар 0,1-2,0; дистиллированная вода — остальное. Содержа" ние живых бактерий в 1 мл через 48 и 16 ч культивирования составляет для В, bifidum 107 -10, В. adolescentis МС42-10 -10 . 2 табл, 1271872

35

40 при 37ОС.

Изобретение относится к технической микробиологии, молочной промышленности, медицине и касается состава питательных сред для выделения, культивирования и количественного учета живых клеток бифидобактерий в молочных продуктах лечебного и диетического питания, фекалиях и других субстратах, Цель изобретения — повышение качества среды за счет обеспечения стабильности ростовых свойств, Оптимизация состава питательной среды по ростовым свойствам и активности, введение стимуляторов роста бифидобактерий и подбор компонентов питательной среды обеспечивает коли чество жизнеспособных клеток 10—

10 в 1 мл с сохранением исходных

9 морфологических признаков и совокупности биологических свойств, В табл. 1 приведены испытанные варианты предлагаемой питательной среды, На полужидких средах с содержанием агара 0,075-0,2Х. при посеве 5Х

16-часовой культуры В.adolescentis

NC-42 наблюдается интенсивный рост через 16 ч культивирования при 37 С на средах 1 — 5, а на средах ? и 6 наблюдается задержка роста бифидо бактерий — интенсивное помутнение среды происходит только к 24 ч. В среде 2 снижение массовой доли кукурузного экстракта до 0,3% и цистина до 0,05Х. тормозит интенсивность роста культуры. К таким же результатам приводит снижение пептона и лактозы до 0,7Х в среде 6, Повышение массовой доли пептона и.лактозы до 1,2Х и цистина до

0,03% существенного влияния на ускорение роста бифидобактерий не оказывает и находится на уровне сред

3-5, Твердые среды с содержанием araра 1,8-2Х позволяют получать характерный рост изолированных колоний бифидобактерий при выделении чистых культур.

При посевах чистых культур на полужидкую среду 3 и 4 с соцержанием агара 0,1Х в пробирках создаются достаточные условия для роста микробов по всему объему среды с наличием поверхностной стерильной зоны, Увеличение агара до 0,2Х в среде 5 позволяет получать изолированные колонии в виде гвоздиков, легко поддающиеся подсчету, Натрий фосфорно-кислый двухзамещенный в количестве 0,05-0„1Х и калий фосфорно-кислый однозамещенный в количестве 0,15-0,2Х. обеспечивают стимуляцию роста бифидобактерий. Увеличение фосфорных солей в среде 3 ухудшает прозрачность среды, а уменьшение их в среде 2 ведет к снижению ростовых свойств среды, Добавление натрия лимонно-кислого трехзамещенного в количестве 0,5 0 8Х позволяет поддерживать белки кукурузного экстракта в растворенном состоянии, чем достигается необходимая прозрачность среды, Проведенными испытаниями определяют оптимальные количественные соотношения компонентов среды, Сочетание экстракта кукурузы с перечисленными компонентами обеспечивает ростовую активность среды, не уступающую наиболее эффективным партиям известной.печеночно-цистино-. вой среды, Оценку ростовых свойств среды проводят путем посева 16-часовой культуры бифидобактерий в количестве 5Х и культивирования при температуре 37 С, Результаты учитывают через 16-48 ч по наличию интенсивного роста культуры в зависимости от видовой принадлежности. Для посева используют штаммы В, bifidum

1 и В, adolescentis МС-42. Контролем служит печеночно-цистиновая среда

Блаурока. Определение количества микроорганизмов в конце культивирования в 1 мл контрольной и испытуемой среды проводят путем посева серийных разведений на печеночно-цистиновую среды Блаурока, Результаты учитывают через 72 ч культивирования

В табл. 2 приведены сравнительные характеристики предлагаемой среды и печоночно-цистиновой среды Блаурока.

Данные, приведенные в табл. 2, свидетельствуют о том, что предлагаемая среда не уступает по ростовой эффективности известной, так как количество жизнеспособных микробных клеток бифидобактерий, вырастающих на ней, не уступает их числу на лучших партиях печеночно-цистиновой среды, Это свидетельствует о достаточном содержании необходимых компо127 нентов и их оптимальных количественных соотношениях в составе предлагаемой среды.

Предлагаемая питательная среда отличается постоянством состава, что обеспечивает высокую воспроизводимость результатов по ростовой активности, обладает прозрачностью, Ее приготовление не требует TDvIIopMKHz подготовительных операций, Среда мо- !ð жет быть быстро приготовлена в лабораторных условиях, В ней исключена необходимость использования животного сырья пищевого назначения (говяжья печень) и дефицитного компонента — твина-80, ее стоимость вдвое ниже стоимости известной среды.

Предлагаемая питательная среда приготавливается следующим образом.

Экстракт кукурузы разводят водопроводной водой в соотношении 1:6, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и стерилизуют при давлении 0 05 МПа (112 С) в течение 30 мин.

В емкость, содержащую 700-800 мл 25 дистиллированной воды, вносят 9-10 г пептона, 9-10 г лактозы, 30-60 мл предварительно разведенного в соотношении 1:6 и простерилизованного экстракта кукурузы, 100-200 мг солянокислого L --цистина, 5-8 г лимоннокислого натрия трехзамещенного, 100200 мг магния серно-кислого 7-водного, 0,5-1,0 г натрия фосфорно-кислого двухзамещенного 12-водного, 1,5-2,0 г калия фосфорно-кислого од35 нозамещенного, 1,0-2,0 r агар-агара для жидкого варианта среды или 1820 г агар-агара для твердого варианта среды и доводят объем дистил40 лированной водой до 1 л. Смесь нагревают до расплавления агара, устанавливают рН на уровне 7,1 при помощи 40Х-ного раствора NaOH или

25Х-ного раствора NH

45 в пробирки или флаконы и стерилизуют при давлении 0,05 МПа (112 С) в течение 30 мин, Полученная среда обладает высокой ростовой активностью, П р и м. е р 1, Среда для выделе50 ния бифидобактерий, Предварительно кукурузный экстракт разводят водопроводной водой в соотношении 1:6, т ° е. к 20 мл кукурузного экстракта добавляют 100 мл во55 ды, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и стерилизуют при давлении

0,05 МПа (1!2 С) в течение 30 мин, 1872 4

В емкость, содержащую 700-800 мл дистиллированной воды, вносят 10 г пептона, 10 г лактозы, 60 мл предварительно разведенного в соотношении

1:6 и простерилиэованного кукурузного экстракта, 200 мг соляно-кислого

L-цистина, 5 г лимонно-кислого натрия трехзамещенного, 200 мл магния серно-кислого 7-водного, 0,5 г натрия фосфорно-кислого двухзамещенного 12-водного, 1,5 г калия фосфорно.кислого однозамещенного, 20 r агарагара и доводят объем дистиллированной водой до 1 л. Смесь нагревают до расплавления агара, устанавливают рН на уровне 7,1 при помощи 407-ного растворà NaOH или 257-ного раствора

NH OH разливают в пробирки высоким столбиком по 10 мп, после чего стерилизуют при 0,05 ИПа в течение

30 мин.

Перед посевом пробирки со средой нагревают в водяной бане до полного расплавления агара и охлаждают до

45 С, В каждую пробирку вносят по

1 мл взвеси испытуемого материала, предварительно разведенного физиологическим раствором до 10, Посевы инкубируют при 37 .С в течение 72 ч в условиях обычного термостата до образования типичных для бифидобактерий колоний.

Пример 2, Среда для количественного учета бифидобактерий в молочных продуктах и бактериальных препаратах, Питательную среду готовят указан-: ным в примере 1 способом, с внесением агар-агара в количестве 2 г на

1 л, разливают высоким столбиком в пробирки и стерилизуют пс приведенному режиму.

Перед посевом пробирки со средой нагревают в водяной бане до расплавления агара и охлаждают до 40 С. В каждую пробирку вносят по I мл взвеси посевного материала, предварительно разведенного физиологическим раствором до 10 о Посевы инкубируют 48 ч при 37 С °

Пример 3. Среда для лабораторного культивирования бифидобактерий.

Предварительно кукурузный экстракт разводят водой в соотношении 1:6, т,е ° к 20 мл кукурузного экстракта добавляют 100 мл воды, фильтруют че" рез ватно-марлевый фильтр и стерилизуют при 0,05 МПа в течение 30 мин.

0,01-0,02

0,01-0,02

0,05-0,1

Остальное

Т аблиц а 1

Сопер>кание компонентов. в среде

Компоненты

7 I 8

1 1 2 . 3 4

)

0 Ч

1 1

0,7

1!ептон

0,7

1,2

Лактоза

Кукурузный экстракт

О,? 1,2 0,5 1

0,5

0 ь " 0„8

0„5

1.-цистин солянокнс.ггый

0,03 0,005 0,01 0,02 0,01 0,01 0,02 0,01

5 127

В емкость, содержащую 700-800 мл дистиллированной воды, вносят 9 г пептона, 9 г лактозы, 30 мл предварительно разведенного в соотношении.

1:6 и простерилизованного кукурузного экстракта, 100 мг соляно-кислого

1,Цистина ь 8. г JIHMQHHoKHcJIo I o HBT рия трехзамещенного, 100 мг магния серно-кислого 7"водного, l 0 г натрия фосфорно-кислого двухзамещенного

12-водного, 2 r калия фосфорно-кислого однозамещенного, 1 г агар"агара и доводят объем до 1 л.

Смесь нагревают до расплавления агара, устанавливают рН на уровне

7 2 при помощи 40%-ного раствора

Na0H или 25%-ного раствора 11Нз,ОН, разливают в пробирки высоким стопбиком или во флаконы и стерилиэуют при

0,05 МПа в течение 30 мин.

Перед посевом среду регенерируют ча водяной бане в течение 10 мин, охлаждают до 37 С и засеивают чистой культурой рабочего штамма бифидобактерий из расчета 5% инокулята от объема питательной среды. Посевы выдерживают при 37ь С в течение

16 ч и более (в зависимости ат видовой принадлежности) до интенсивного помутнения питательной среды.

Количество жизнеспособных микробных клеток бифидобактерий, вырастаюших на предлагаемой питательной сре" де, составляет 10ь-109 в 1 мл, Предлагаемая среда обладает высокой ростовой активностью, имеет более низкую стоимость и может бь!ть просто и быстро приготовлена.

1872 б

Формула изобретения

Питательная среда для выделения и культивированпя бифидобактерий, содержащая пелтон „ лак. osy, L-цистин . соляно-кислый, агар-агар, соль нат" рия и дистиллированн ?ю воду, о т л и ч а ю щ а я с я тем, что, с целью повышения каче тва среды за

10 счет обеспечения стабильности ростовых свойств, она дополнительно содержит кукурузный экстракт, магний

1 серно-кислый, калий фосфорно-кислый однозамещенный, а из солей натрия— натрий лимонно-кислый трехзамещенный, натрий фосфорно-кислый двухэамещенный при следуюшем соотношении компонентов, мась%;

Пелтон 0,9-1,0

Лактоза 0,9-1,0

Кукурузный экстрактт 0,5-1,0

L-Цистин coJIHHQ кислый

25 Натрий лимоннокислый трехзамещенный 0,5-0,8

Магний серноки слый

30 Натрий фосфорнокислый двухзамещенный

Калий фосфорнокислый однозамещенный 0,15-0,2

Агар-агар 0,1-2,0

Дистиллированная вода

1271872

Продолжение табл.1

Содержание компонентов в среде

Компоненты

1 2 3 4 5 6 7 8

06 05 0 7 06 08

0,6

0,3

Магний сернокислый 7-водный

0 01 0 Ol 0,0! 0 О! 0,02 O OI 0 01 0,02

0,05 О,! 0,15 0,1 0,1

0 05 0,2

0,0!

0,3

020!50250202

0,1 0,2 0,2 1,8 2

О,!

О,!

0,075 0,075 Oуl

Агар

Вода дистиллированная

Осталь- Осталь- Осталь" Осталь- Остальное ное ное ное

Осталь- Остальное ное

Таблица 2

Питательная среда

Время культивирования, ч одержание живых актерий в ) мл

Предлагаемая

l0 «105 10о

16

Выборочные наиболее активные партии печеночноцистиновой среды

108 10â 10з

Составитель И, Привалова

Техред A.Kðàâ÷óê Корректор М, Самборская

Редактор Н. Яцола

Заказ 6310/25

Тираж 490 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР па делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Натрий лимоНнокислый трехэамеще нный

Натрий фосфорнокислый двухэаиещенный !2-водный

Калий фосфорнокислый одноэаиещенный

В. bifi- В. adole .dum 1 centis

МС-42

bifi В. adoum 1 lescentis

МС-42