Способ отбраковки легкоиндуцируемых лизогенных штаммов мезофильных молочнокислых стрептококков

Способ отбраковки легкоиндуцируемых лизогенных штаммов мезофильных молочнокислых стрептококков

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к сыроделанию, может быть использовано в селекции МОЛОЧНО-КИСЛЫХ бактерий, включаемых в состав заквайок для сыров, и позволяет упростить оценку легкоиндуцируемых лизогенных штаммов мезофильных МОЛОЧНО-КИСЛЫХ стрептококков. Исследуемые штаммы культивируют до логарифмической фазы роста, ресуспендируют в солевом раствореj облучают . УФ-излучением дозой 25 Дж-м и культивируют в питательном бульоне при оптимальной температуре. О фаголизисе культур судят по их ростовой реакции в течение 2-3 ч после облучения, оцениваемой по временному иймененик (снижению) оптической плотности. 1 з.п.ф-лы, 2 ил. с (О (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (И) А1

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTGPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3899330/28-13 (22) 17. 05. 85 (46) 23.02.87. Бюл. № 7 (71) Алтайский филиал Всесоюзного научно-исследовательского института маслодельной и сыродельной промьппленности (72) Т.В.Мальцева, Я. P. Каган, В.П.Мальцев, Г. Н. Унгер, Е. К.Матвеева и Э.В.Кузьмин (53) 576.852.24(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР №- 761557, кл. С 12 N 1/00, 1978. (54) СПОСОБ ОТБРАКОВКИ ЛЕГКОИНДУЦИРУЕМЫХ ЛИЗОГЕННЫХ ШТАММОВ МЕЗОФИЛЬНЫХ

МОЛОЧНО-КИСЛЫХ СТРЕПТОКОККОВ (s)) 4 С 12 N 1/00

А pp„% )f ) Я (57) Изобретение относится к сыроделанию, может быть использовано в селекции молочно-кислых бактерий, включаемых в состав заквасок для сыров, и позволяет упростить оценку легкоиндуцируемых лизогенных штаммов мезофильных молочно-кислых стрептококков.

Исследуемые штаммы культивируют до логарифмической фазы роста, ресуспендируют в солевом растворе; облучают .

УФ-излучением дозой 25 Дж м и куль тивируют в питательном бульоне при оптимальной температуре. О фаголизисе культур судят по их ростовой реакции в течение 2-3 ч после облучения, оцениваемой по временному изменению (снижению) оптической плотности.

1 з.п.ф-лы, 2 ил.

12916

Изобретение относится к сыроделию и может быть использовано в селекции мезофильных молочно-кислых стрептококков, включаемых в состав заквасок для сыров. 5

Целью изобретения является созда- ние более простого способа легкоиндуцируемых лизогенных штаммов мезофильных молочно-кислых стрептококков.

Предлагаемый способ заключается в следующем.

Клетки исследуемой культуры мезофильных молочно-кислых стрептококков, находящиеся в начале логарифмической фазы роста (3-4-часовая бульонная

15 культура), отделяют от питательной среды, суспендируют в стерильном солевом растворе с рН 6,8-7,2, облучают УФ-излучением дозой 25 Дж м, 20 помещают в питательный бульон и инкубируют при температуре, оптимальной для роста культуры (25 С для штаммов вида С. cremeris и 30 С для штаммов вида S. lactis u S. lactis subsp. di->>

acetylactis). В процессе инкубации регистрируют рост культуры по изменению величины оптической плотности контролируемой смеси (или интенсив-, ности светорассеяния) во времени. е 30

В период от 1,0 до 2,5 ч от начала инкубации облученных клеток (в зависимости от штаммовой специфичности) у легкоиндуцируемых лизогенных культур при указанной дозе УФ-облу35 чения наблюдается временное уменьшение или торможение оптической плотности (или светорассеянйя), связанное с лиэисом определенной части клеточной популяции под действием индуцированного умеренного фага. Такие культуры не следует включать в состав заквасок для сыроделия как потенциально опасные с точки зрения продукции бактериофагов. . 4

Пример 1. Выявление легкоиндуцируемых лизогенных культур турбидиметрическим методом с помощью фотоэлектрокалориметра. Пробирку со стерильным бульоном, приготовленным из обезжиренного молока, гидролиэованного панкреатином (среда БГМ), инокулируют 1 мл 18-часовой культуры производственного штамма S.lactis

94 и инкубируют 3 ч при 30 C. Клетки собирают центрифугированием (10 мин при 5000 об/мин " ) и ресуспендируют в стерильном физиологическом растворе до плотности популяции около 5

02 2 I 10 кое мл " . 9 мл полученной суспензии в стерильной чашке Петри (диаметр 93 мм) подвергают УФ-облучению дозой 25 Дж м при постоянном перемешивании с помощью магнитной мешалки.

Источником УФ-излучения служит бактерицидная лампа БУВ-15.

Аналогичным образом готовят и облучают клеточные суспензии производственных штаммов S.lactis 350, S.cremoris 49 и $.lactis subsp. diacety1асtis 625, . Сразу после облучения

2 мл клеточной суспензии смешивают с 2 мл среды БГМ двойной концентрации s стерильной оптической кювете (длина оптического пути 10 мм) с крышкой, инкубируют 3 ч при 25 С (S. crenoris) или при 30 С (остальные штаммы стрептококков). Через каждые 15 мин инкубации измеряют оптическую плотность полученной смеси с помощью электрофотоколори-. метра КФК КЛ 4,2 (перед каждым измерением смесь в кюветах перемешивают с помощью магнитной мешалки) .

На фиг. 1.. представлены полученные графики изменения оптической плотности облученных культур в зависимости от времени инкубации. Из представленных графиков видно, что штаммы S. lactis 94 и S.cremoris 49 легко индуцируются, а штаммы S.lactis 350 и $.lactis subsp. diacetylactis 625 не индуцируются при данной дозе УФ-излучения. Таким образом, штаммы S ° lac!

tis 94 и S.cremoris 49 не рекомендуется включать в состав заквасок для сыроделия.

Пример 2. Выявление легкоин-» дуцируемых лизогенных культур с помощью автоматизированной оптической установки, разработанной в Алтайском филиале ВНИИИС. Суспенэию клеток исследуемых молочно-кислых стрептококков S.lactis (индивидуальные штаммы 94 и 350), приготовленную и облученную УФ-излучением, как указано в примере 1, смешивают с равным объемом среды БГИ двойной концентрации; помещают в стерильную оптическую кювету, расположенную в термостатиро-ванном блоке и оснащенную устройством, обеспечивающим непрерывное перемешивание культуральной среды, и инкубируют 3 ч при 30 С. В процессе инкубации через каждые 3 мин проводят автоматическое измерение оптической плотности смеси с помощью

1291602 управляющей программы компьютера с одновременной выдачей данных на цифропечать. Полученные таким образом результаты измерений оптической плот —. ности культур S.lactis 94 и 350 пред- 5 ставлены в виде графиков на фиг.2.

Они не отличаются от результатов, полученных ручным способом для соответствующих штаммов мезофильных молочно-кислых стрептококков (пример 1). 0

Пример 3. Приготовление заквасочной комбинации и сухого бактериального препарата. Производственные штаммы мезофильных молочнокислых стрептококков S.lactis 94, S.lactis

198>, S.lactis 203,О, S.cremoris 49, S.lactis subsp. diacetylactis 407, S.lactis subsp. diacetylactis 625 входящие в состав заквасочной комбинации, проверяют предлагаемым способом на наличие легкоиндуцируемого лиэогенного состояния. Штаммы S.làñtis 94 и S.cremoris 49, оказавшиеся легкоиндуцируемыми лизогенными стрептококками (примеры 1 и 2), исключают из состава закваски для сыров как потенциально опасные в отношении продукции бактериофага на производстве.

Взамен их в состав эаквасочной комбинации вводят биологически совместимые штаммы S.lactis 350 и S.cremoris 3M-5, аналогичные по производственно ценным свойствам исключенным штаммам, но не дающие реакции фаголизиса при УФ-облучении дозой 25 Дж.м 35

В производственной лаборатории -биопрепаратов Алтайского филиала

ВНИИМСа на основе указанной заквасочной комбинации выработали партию сухого бактериального препарата 9 3 M.40

Препарат разослан на сыродельные заводы Западной Сибири и Казахстана для использования при производстве твердых сычужных сыров с низкой температурой второго нагревания. 45

Преимущество способа заключается в том, что для выявления легкоиндуцируемых лиэогенных штаммов меэофильных молочно-кислых стрептококков, представляющих потенциальную опасность для сыроделия, не требуется наличия дорогостоящего электронного микроскопа и проведения сложных и трудоемких операций, свяэанных с электронно-микроскопическим исследованием бактериальных клеток. Применение простого, широко используемого в микробиологической практике оптического метода контроля роста культур и простая дешевая аппаратура (фотоэлектрокалориметр любой марки) позволяют упростить процесс отрраковки.

При этом появляется воэможность автоматизации способа, что облегчает эксплуатацию соответствующей аппаратуры.

Формула изобретения

1. Способ отбраковки легкоиндуцируемых лиэогенных штаммов мезофильных молочно-кислых стрептококков, заключающийся в культивировании бактерий до достижения ими логарифмической фазы роста, отборе проб после культивирования и последующей оценке культур для выявления пригодных для дальнейшего использования, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью упрощения оценки, культуру стрептококков после отбора помещают в солевой раствор с рН 6,8-7,2 и облучают УФ-излучением дозой 25 Дж.м, после чего помещают в питательный бульон и инкубируют при оптимальной температуре роста, оценивая ее развитие по изменению оптической плотности полученного раствора, а отбраковку осуществляют по результату сравнения измеренного значения по отношению к заданному значению.

2. Способ по п. 1, о т л и ч а юшийся тем, что в качестве параметра оценки используется светорассеяние полученного раствора.

i 291602

Время, м

Фиа!Составитель С. Петровых

Редактор Н.Егорова Техред N.Êoäàíè÷ Корректор В.Бутяга

Заказ 204/29 Тираж 500 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r.Ужгород, ул.Проектная, 4