5-гидрокси-3,6-диметилурацил, проявляющий иммунотропную активность

Реферат

 

Использование: в качестве иммунотропного средства. Сущность изобретения: 5-гидрокси-3,6-диметилурацил, БФ: C6H8N2O3 , выход 55,3% , т.пл. >270°C. Реагент 1: 6-метилурацил-5-аммонийсульфат. Реагент 2: диметилсульфат. Процесс ведут в воде в присутствии щелочи. 2 табл.

Изобретение относится к области органической химии, конкретно к новому химическому соединению 5-гидрокси-3,6-диметилурацилу формулы проявляющему иммунотропную активность.

Аналогом по строению и назначению является 6-метилурацил, который характеризуется недостаточно выраженной иммунотропной активностью.

Новое соединение 5-гидрокси-3,6-диметилурацил, более эффективно в части проявления иммунотропной активности, его получают в условиях известного способа путем обработки 6-метилурацил-5-аммонийсульфата в щелочной среде при 0-15оС диметилсульфатом при соотношении компонентов 6-МУ-5АС NaOH ДМС 1:4:4 с последующим повышением температуры бани до кипения, перемешиванием при этой температуре 2 ч и выделением 5-гидрокси-3,6-диметилурацила фильтрацией кристаллов, выход составляет 52,5% чистота по данным ТСХ 100% 5-Гидрокси-3,6-диметилурацил с Тпл. > 270оС мало растворимо в воде и не растворимо в органических растворителях.

Чистота 5-гидрокси-3,6-диметилурацила доказана методом ГЖХ кремнийпроизводного. 5-Гидрокси-3,6-диметилурацил не имеет примеси.

Найдено, C 45,95; H 5,10; N 17,80; Вычислено для C6H8N2O3, С 46,15; H 5,16; N 17,94; O 30,74. Мол. м. 156,14.

Положение заместителя доказано ИК-, УФ-спектрами.

Максимум поглощения УФ-спектра с изменением рН среды от 1 до 12 дает батохромный сдвиг на 34 нм.

рН 12 max 313,50 min 276,25 рН 7 max 278,65 min 245,15 рН 1 max 278,65 min 245,15 что характерно для урацилов, замещенных по третьему атому азота цикла.

ИК-спектр (, см-1): 1096-1256 ( C- OH, VC-N), 1376 (S CH3); 1604, 1680, 1720 (VC=O); 1528 (VCN + NH); 3144 (VNH); 3226, 3248 (2VCN); 3328 (OH); 2856, 2880, 2928 (VC=C, алиф. CH); 1460 (VCH2, CH3).

Исследования проводили на белых беспородных мышах массой 18-20 г, полученных из питомника лабораторных животных "Рапполово", АМН СССР.

Острая токсичность определялась на беспородных мышах обоего пола при однократном внутрибрюшинном введении. Вводились дозы от 50 до 1600 мг/кг. После введения токсических доз через 5-10 мин у животных наблюдалась вялость, вытягивание конечностей, снижение подвижности. Смерть наступала от остановки дыхания.

Параметры токсичности определяли по методу Кербера. Пpи внутрибрюшинном введении ЛД50 составляет 1000,0 27,6.

На основании классификации токсичности веществ при введении под кожу и в брюшную полость данное соединение относится к малотоксичным.

Влияние соединений на иммунную систему изучали на моделях гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) и антителообразования.

Гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ) к 2,4-динитрофторбензолу (ДНФБ) воспроизводили сенсибилизацией животных нанесением на кожу живота 25 мкл 0,5%-ного раствора ДНФБ в смеси ацетона с оливковым маслом (4:1). Через 4 сут после сенсибилизации на предварительно измеренные микрометром уши капали по 20 мкл 0,25%-ного раствора ДНФБ. Реакцию оценивали по отеку уха через 24 ч после нанесения разрешающей дозы ДНФБ. Соединение вводили в дозе 1/10 от ЛД50 (100,0 мг/кг) в течение 4 сут, начиная с первого дня после сенсибилизации. Структурный аналог соединения 6-метилурацил вводят в общепринятой дозе (200 мг/кг) по той же схеме.

Значение прироста толщины ушей в опытной группе такое же, как в контрольной, что позволяет говорить об отсутствии супрессирующего влияния на клеточное звено иммунитета (табл. 1).

Влияние соединений на гуморальное звено иммунного ответа определяли по методу N.K. Jerne, A.A. Nordin в модификации A. Cunniughem.

Мышей иммунизировали внутрибрюшинным введением нормиммунной дозы эритроцитов барана за 4 полных суток до ответа. Взвесью спленоцитов эритроцитов барана и комплемента морской свинки в соотношении 1:1:2 заполняли камеры. После инкубации в термостате при температуре 37оС в течение 1,5 ч подсчитывали визуально число зон гемолиза, соответствующее количеству антителообразующих клеток (АОК). Производили пересчет АОКх106спленоцитов. Соединения вводили на +1 до +4 сут после иммунизации в дозе 1/10 ЛД50. В качестве препарата сравнения использовали 6-метилурацил в дозе 200 мг/кг в том же режиме введения.

Влияние соединений на образование АОК в селезенках беспородных мышей-самцов дано в табл. 2.

Соединение (12-89-1) 5-гидрокси-3,6-диметилурацил характеризуется выраженной иммунотропной активностью, стимулируя гуморальный имунный ответ значительно лучше, чем 6-метилурацил, не влияя на клеточное звено иммунитета.

П р и м е р 1. 5-Гидрокси-3,6-диметилурацил.

В трехгорлую колбу емкостью 1000 мл, снабженную механической мешалкой, обратным холодильником, загружают 60 г (1,5 моль) едкого натра, заливают 400 мл воды, включают мешалку. Полученный раствор едкого натра охлаждают до 30-40оС, а затем присыпают 119,6 г (0,5 моль) 6-метилурацил-5-аммонийсульфата и перемешивают до растворения. Реакционную смесь охлаждают до 6-15оС и при этой температуре прибавляют по каплям в течение 1 ч 190,5 г (1,51 моль) или 143 мл диметилсульфата. После полного прибавления диметилсульфата температуру бани нагревают в течение 1-2 ч до 85-95оС и при этой температуре перемешивают 2 ч, охлаждают, вливают 200 мл хлороформа, перемешивают 10 мин, кристаллы отфильтровывают на шоттовской воронке, промывают (4х50 мл) водой до нейтральной реакции, ацетоном (2х50 мл), подтягивают водоструйным насосом и получают 43,2 г (55,3%) 5-гидрокси-3,6-диметилурацила с Т.пл. > 270оС, мало растворимого в воде, не растворимого в органических растворителях.

По данным ТСХ 5-гидрокси-3,6-диметилурацил не имеет примеси.

Найдено, C 45,95; H 5,10; N 17,80. Вычислено для C6H8N2O3, C 46,15; H 5,16; N 17,94; O 30,74; М.в. 156,14.

ИК-спектр (, см-1): 1096-1256 ( C- OH, VC-N); 1376 (S CH3); 1604, 1680, 1720 (VC=O); 1528 (VCN + NH); 3144 (VNH); 3226, 3248 (2VCN); 3328 (ОН); 2856, 2880, 2928 (VC=C, Vалиф. CH); 1460 (VCH2, CH3).

Иммунотропная активность соединений иллюстрируется следующими примерами.

П р и м е р 2. В качестве модели клеточного иммунитета исследовали реакцию гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) у беспородных мышей. Реакцию ГЗТ воспроизводили обычным способом, сенсибилизируя мышей нанесением на выстриженный живот 25 мкл 0,5%-ного раствора 2,4-динитрофторбензола (ДНФБ) в смеси ацетона с оливковым маслом (4:1). Разрешающую дозу (20 мкл 0,25%-ного раствора ДНФБ) наносили на 4-е сут после сенсибилизации на уши с предварительно измеренной толщиной. Соединение 12-89-1 вводили внутрибрюшинно в дозе 1/10 от ЛД50 с +1 по +4 день. Всего 4 введения. Структурный аналог соединения 6-метилурацил, взятый в качестве эталона, вводили в общепринятой дозе (200 мг/кг) по той же схеме. Полученные данные сведены в табл. 2.

П р и м е р 3. В качестве модели первичного иммунного ответа использовали метод локального гемолиза в геле N.K. Jerne, A.A. Nordin в модификации A. J. Cunningham.

Беспородных мышей иммунизировали внутрибрюшинным введением нормиммунной дозы (2х108) эритроцитов барана за 4 полных суток до эксперимента. Количество антителообразующих клеток (АОК) определяли по числу зон гемолиза в камерах. Производили пересчет АОК на 106спленоцитов. Полученные данные сведены в табл. 2.

П р и м е р 4. Острую токсичность определяли на беспородных мышах обоего пола массой 18-20 г при однократном внутрибрюшинном введении в диапазоне доз от 50 до 1600 мг/кг. После введения токсических доз через 5-10 мин у животных наблюдалась вялость, снижение подвижности, токсические судороги.

Параметры токсичности определяли по методу Кербера. ЛД50 соединения равно 1000,0 122,6 мг/кг.

На основании классификации токсичности веществ при введении под кожу и в брюшную полость данное соединение относится к малотоксичным.

5-гидрокси-3,6-диметилурацил проявляет иммунотропную активность, стимулирует гуморальный иммунный ответ лучше, чем 6-метилурацил, не влияя на клеточное звено иммунитета.

Формула изобретения

5-Гидрокси-3,6-диметилурацил формулы проявляющий иммунотропную активность.

РИСУНКИ

Рисунок 1