N-ариламиды антраниловой кислоты и тиоантраниловой кислоты

N-ариламиды антраниловой кислоты и тиоантраниловой кислоты

Реферат

Изобретение относится к новым бензамидным производным, способам их получения, их применению в способе лечения человека или животного, к их применению индивидуально или в сочетании с одним или несколькими другими фармацевтически активными соединениями, прежде всего для лечения неопластического заболевания, такого как опухолевое заболевание, ретинопатия и связанная с возрастом дегенерация желтого пятна; к способу лечения такого заболевания у животных, прежде всего у людей, и к применению такого соединения, индивидуально или в сочетании с одним или несколькими другими фармацевтически активными соединениями для приготовления фармацевтической композиции (лекарственного средства), предназначенного в частности, для лечения неопластического заболевания, ретинопатии и связанной с возрастом дегенерации желтого пятна.

Известно, что определенные заболевания связаны с нарушением регуляции ангиогенеза, например болезни, связанные с неоваскуляризацией глаза, такие как ретинопатии (включая диабетическую ретинопатию), связанная с возрастом дегенерация желтого пятна; псориаз, гемангиобластома, гемангиома, атеросклероз, воспалительное заболевание, такое как ревматоидное или ревматическое воспалительное заболевание, прежде всего артрит, например ревматоидный артрит, или другие хронические воспалительные заболевания, такие как хроническая астма, артериальный или пост-транплантационный атеросклероз, эндометриоз, и прежде всего неопластические заболевания, например так называемые твердые опухоли и опухоли жидких тканей (такие как лейкемии).

Современные исследования позволили установить, что в основе механизма, регулирующего рост и дифференциацию сосудистой системы и ее компонентов как в процессе эмбрионального развития, так и при нормальном росте, а также при многочисленных патологических аномалиях и заболеваниях, лежит ангиогенный фактор, известный как "сосудистый эндотелиальный фактор роста" ("Vascular Endothelial Growth Factor") (VEGF), а также его клеточные рецепторы (см. Breier G. и др. Trends in Cell Biology 6, 454-456 [1996] и ссылки, цитированные в этой работе).

VEGF представляет собой димерный связанный дисульфидным мостиком гликопротеин с молекулярной массой 46 кДа, и он относится к группе "тромбоцитарных факторов роста" ("Platellet-Derived Growth Factor") (PDGF). Он продуцируется нормальными линиями клеток и линиями опухолевых клеток, является митогеном, специфичным для эндотелиальных клеток, проявляет ангиогенную активность в опытных системах in vivo (например, в роговице кроликов), является хемотаксическим в отношении эндотелиальных клеток и моноцитов и индуцирует активаторы плазминогена в эндотелиальных клетках, которые участвуют в протеолитическом разложении внеклеточного матрикса при образовании капилляров. Известен ряд изоформ VGEF, которые обладают сопоставимой биологической активностью, но различаются типом секретирующих их клеток и своей гепаринсвязывающей активностью. Кроме того, существуют другие представители семейства VEGF, такие как "плацентарный фактор роста" ("Placenta Growth Factor") (PLGF) и VEGF-С.

Рецепторы VEGF представляют собой трансмембранные тирозинкиназные рецепторы. Они отличаются наличием внеклеточного домена с семью иммуноглобулинподобными доменами и внутриклеточного тирозинкиназного домена. Известны различные типы рецепторов VEGF, например VEGFR-1, VGEFR-2 и VGEFR-3.

Большое количество опухолей человека, в частности глиомы и карциномы, экспрессируют высокие уровни VEGF и его рецепторов. Это привело к гипотезе о том, что VEGF, вырабатываемый клетками опухоли, может паракринным образом стимулировать рост кровеносных капилляров и пролиферацию эндотелия опухоли и, таким образом, вследствие усиленного кровоснабжения может ускорять рост опухоли. Повышенная экспрессия VEGF может объяснить возникновение отека мозга у пациентов, страдающих глиомой. Прямое доказательство роли VEGF как фактора ангиогенеза опухоли in vivo было получено на основе исследований, в которых ингибировали экспрессию VEGF или активность VEGF. Это достигали с помощью антител, ингибирующих активность VEGF, с использованием доминантно-негативных мутантов VEGFR-2, ингибирующих трансдукцию сигнала, или с использованием методов антисмысловой РНК VEGF. Все подходы приводят к уменьшению роста линий клеток глиомы или других линий опухолевых клеток in vivo вследствие ингибированного ангиогенеза опухоли.

Считается, что ангиогенез является абсолютно необходимым для опухолей, максимальный диаметр которых превышает приблизительно 1-2 мм; до этого предела кислород и другие питательные вещества могут доставляться в опухолевые клетки путем диффузии. Таким образом, рост любой опухоли, безотносительно к ее происхождению и вызывающей ее причине, зависит от ангиогенеза после достижения определенного размера.

Три основных механизма играют важную роль в противоопухолевой активности ингибиторов ангиогенеза: 1) ингибирование роста сосудов, в частности капилляров, в аваскулярных опухолях, находящихся в состоянии покоя, результатом чего является отсутствие роста опухоли благодаря достигнутому балансу между апоптозом и пролиферацией; 2) предотвращение миграции опухолевых клеток благодаря отсутствию кровотока в направлении к опухолям и от них; 3) ингибирование пролиферации эндотелиальных клеток, что устраняет паракринное стимулирующее рост воздействие, оказываемое на окружающую ткань эндотелиальными клетками, которые в норме выстилают сосуды.

При создании изобретения неожиданно установлено, что описанные ниже бензамидные производные формулы I представляют собой новый класс соединений, которые обладают ценными фармакологическими свойствами и ингибируют, например, активность тирозинкиназных рецепторов VEGF, рост опухолей и зависящую от VEGF пролиферацию клеток, или могут применяться для лечения главным образом воспалительных ревматических или ревматоидных заболеваний, таких как ревматоидный артрит и/или боли, или других болезней, которые указаны выше и ниже.

Соединения формулы I позволяют, например, реализовать неожиданный новый терапевтический подход, в частности, в отношении заболеваний, для лечения, а также для предупреждения которых ингибирование ангиогенеза и/или тирозинкиназного рецептора VEGF оказывает благоприятное действие.

Подробное описание изобретения

Изобретение относится к применению соединения формулы I

где W обозначает О или S;

Х обозначает NR₈;

Y обозначает CR₉R₁₀-(СН₂)_n, где R₉ и R₁₀ независимо друг от друга обозначают водород или (низш.)алкил, и

n обозначает целое число от 0 включительно и до 3 включительно; или

Y обозначает SO₂;

R₁ обозначает арил;

R₂ обозначает моно- или бициклическую гетероарильную группу, включающую один или несколько кольцевых атомов азота при условии, что R₂ не может обозначать 2-фталимидил, и в случае, когда Y обозначает SO₂, не может обозначать 2,1,3-бензотиадиазол-4-ил;

любой из радикалов R₃, R₄, R₅ и R₆ независимо друг от друга обозначает Н или заместитель, отличный от водорода, и

R₇ и R₈ независимо друг от друга обозначают водород или (низш.)алкил;

или его N-оксида или фармацевтически приемлемой соли для получения фармацевтического продукта, предназначенного для лечения неопластического заболевания, которое облегчается при ингибировании активности тирозинкиназного рецептора VEGF.

Общие понятия, которые используются выше и ниже в настоящем описании, предпочтительно имеют следующие значения, если не указано иное:

Приставка "(низш.)" обозначает радикал, имеющий вплоть до 7 атомов углерода, прежде всего вплоть до 4 атомов углерода, причем эти радикалы могут быть либо линейными, либо разветвленными и могут иметь одно или несколько разветвлений.

Если для соединений, солей и т.п. используется множественная форма, следует понимать, что она обозначает также отдельное соединение, соль или т.п.

Любые асимметричные атомы углерода (например, в соединениях формулы I, в которых R₉ обозначает (низш.)алкил), могут присутствовать в (R)-, (S)- или в (RS)-конфигурации, предпочтительно в (R)- или (S)- конфигурации. Таким образом, соединения могут находиться в виде смесей изомеров или в виде чистых изомеров, предпочтительно в виде энантиомерно чистых диастереомеров.

Изобретение также относится к возможным таутомерам соединений формулы I.

(Низш.)алкил предпочтительно обозначает алкил, имеющий от 1 включительно и до 7 включительно, предпочтительно от 1 включительно и до 4 включительно, атомов углерода, и может быть линейным или разветвленным; предпочтительно (низш.)алкил обозначает бутил, такой как н-бутил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, пропил, такой как н-пропил или изопропил, этил или предпочтительно метил.

Индекс n предпочтительно равен 0 или 1, особенно предпочтительно 0.

Y предпочтительно обозначает метилен (-СН₂-) или этилен (-СН₂-СН₂-), наиболее предпочтительно метилен.

"Арил" обозначает ароматический радикал, который присоединен к молекуле через связь, расположенную на атоме углерода ароматического кольца радикала. Согласно предпочтительному варианту осуществления арил обозначает ароматический радикал, имеющий 6-14 атомов углерода, в частности фенил, нафтил, тетрагидронафтил, флуоренил или фенантренил, и может быть незамещен или замещен одним или несколькими, предпочтительно до трех, в частности одним или двумя, заместителями, в частности, выбранными из ряда, включающего амино-, моно- или дизамещенную аминогруппу, галоген, алкил, замещенный алкил, гидрокси-, этерифицированную до простого или сложного эфира гидрокси-, нитро-, циано-, карбокси-, этерифицированную до сложного эфира карбоксигруппу, алканоил, бензоил, карбамоил, N-моно- или N,N-дизамещенный карбамоил, амидино-, гуанидино-, уреидо-, меркапто-, сульфо-, (низш.)алкилтиогруппу, фенил, фенокси-, фенилтио-, фенил(низш.)алкилтио-, алкилфенилтиогруппу, (низш.)алкилсульфинил, фенилсульфинил, фенил (низш.)алкилсульфинил, алкилфенилсульфинил, (низш.)алкансульфонил, фенилсульфонил, фенил (низш.)алкилсульфонил, алкилфенилсульфонил, (низш.)алкенил, (низш.)алканоил, галоген(низш.)алкилмеркаптогруппу, галоген(низш.)алкилсульфонил, в частности, такой как трифторметансульфонил, дигидроксибор [-В(OH)₂], гетероциклил и (низш.)алкилендиоксигруппу, присоединенную к соседним кольцевым атомам углерода, такую как метилендиоксигруппа; арил предпочтительно обозначает фенил или нафтил, каждый из которых может быть либо незамещен, либо независимо замещен одним или двумя заместителями, выбранными из ряда, включающего галоген, в частности фтор, хлор или бром; гидроксигруппу; гидроксигруппу, этерифицированную до простого эфира с помощью (низш.)алкила, например метила, или с помощью галоген(низш.)алкила, например трифторметила; этерифицированную до сложного эфира карбоксигруппу, предпочтительно (низш.)алкоксикарбонил, например метоксикарбонил, н-пропоксикарбонил или изопропоксикарбонил; N-монозамещенный карбамоил, в частности карбамоил, монозамещенный (низш.)алкилом, например метилом, н-пропилом или изопропилом; (низш.)алкил, предпочтительно метил, этил или пропил; замещенный алкил, предпочтительно (низш.)алкил, например метил или этил, замещенный (низш.)алкоксикарбонилом, например метоксикарбонилом или этоксикарбонилом; галоген(низш.)алкил, предпочтительно трифторметил; (низш.)алкилсульфинил, такой как метилсульфинил, и (низш.)алкансульфонил, такой как метансульфонил. Арил предпочтительно обозначает 3- или 4-хлорфенил, 3-бромфенил, 4-феноксифенил, 2-, 3- или 4-метилфенил, 4-метоксифенил: 3-или 4-трет-бутилфенил, 4-н-пропилфенил, 4-трифторметилфенил, 3-трифторметилфенил, 3-трифторметоксифенил, 3,4-(трифторметил)фенил, 3-фтор-4-метилфенил, 3-хлор-4-метилфенил, 4-хлор-3-трифторметилфенил, 3-хлор-5-трифторметилфенил, 4-метилсульфинилфенил, 4-метансульфонилфенил, 4-бифенил, нафтил, 2-нафтил; тетрагидронафтил, в частности 5,6,7,8-тетрагидронафтил; гидроксинафтил, в частности 7-гидроксинафтил, 8-гидроксинафтил или 8-гидрокси-2-нафтил; метоксинафтил, в частности 4-метокси-2-нафтил; галонафтил, в частности 4-хлорнафтил или 3-бром-2-нафтил.

Моно- или дизамещенная аминогруппа предпочтительно обозначает аминогруппу, замещенную одним или двумя радикалами, независимо друг от друга выбранными из ряда, включающего (низш.)алкил, такой как метил; гидрокси(низш.)алкил, такой как 2-гидроксиэтил; фенил (низш.)алкил; (низш.)алканоил, такой как ацетил; бензоил; замещенный бензоил, в котором фенильный радикал предпочтительно замещен одним или несколькими, предпочтительно одним или двумя заместителями, выбранными из ряда, включающего нитро-, аминогруппу, галоген, N-(низш.)алкиламино-, N,N-ди(низш.)алкиламино-, гидрокси-, циано-, карбоксигруппу, (низш.)алкоксикарбонил, (низш.)алканоил и карбамоил; и фенил(низш.)алкоксикарбонил, в котором фенильный радикал является незамещенным или предпочтительно замещен одним или несколькими, предпочтительно одним или двумя заместителями, выбранными из ряда, включающего нитро-, аминогруппу, галоген, N-(низш.)алкиламино-, N,N-ди(низш.)алкиламино-, гидрокси-, циано-, карбоксигруппу, (низш.)алкоксикарбонил, (низш.)алканоил и карбамоил; и предпочтительно обозначает N-(низш.)алкиламиногруппу, такую как N-метиламиногруппа, гидрокси(низш.)алкиламиногруппу, такую как 2-гидроксиэтиламиногруппа, фенил(низш.)алкиламиногруппу, такую как бензиламиногруппа, N,N-ди(низш.)алкиламино-, N-фенил(низш.)алкил-N-(низш.)алкиламино-, N,N-ди(низш.)алкилфениламино-, (низш.)алканоиламиногруппу, такую как ацетиламиногруппа, или заместитель, выбранный из ряда, включающего бензоиламино- и фенил(низш.)алкоксикарбониламиногруппу, в которой фенильный радикал в каждом случае является незамещенным или предпочтительно замещен нитро- или аминогруппой, или также галогеном, амино-, N-(низш.)алкиламино-, N,N-ди(низш.)алкиламино-, гидрокси-, циано-, карбоксигруппой, (низш.)алкоксикарбонилом, (низш.)алканоилом, карбамоилом или аминокарбониламиногруппой.

Галоген предпочтительно обозначает фтор, хлор, бром или йод, предпочтительно фтор, хлор или бром.

В предпочтительном варианте осуществления алкил имеет максимум 12 атомов углерода и предпочтительно обозначает (низш.)алкил, предпочтительно метил или также этил, н-пропил, изопропил или трет-бутил.

Замещенный алкил обозначает алкил, как он указан в последнем абзаце, предпочтительно (низш.)алкил, предпочтительно метил; в котором может присутствовать один или несколько, предпочтительно до трех заместителей, прежде всего выбранных из ряда, включающего галоген, предпочтительно фтор, а также амино-, N-(низш.)алкиламино-, N,N-ди(низш.)алкиламино-, N-(низш.)алканоиламино-, гидрокси-, циано-, карбоксигруппу, (низш.)алкоксикарбонил и фенил(низш.)алкоксикарбонил. Особенно предпочтительным является трифторметил.

Этерифицированная до простого эфира гидроксигруппа предпочтительно представляет собой C₈-С₂₀алкилоксигруппу, такую как н-децилоксигруппа, (низш.)алкоксигруппу, предпочтительно такую как метокси-, этокси-, изопропилокси- или н-пентилоксигруппа, фенил(низш.)алкоксигруппу, такую как бензилокси- или также фенилоксигруппа, или в качестве альтернативы или дополнения к указанной ранее C₈-С₂₀алкилоксигруппе, такую группу, как н-децилоксигруппа, галоген(низш.)алкоксигруппа, такая как трифторметилокси- или 1,1,2,2-тетрафторэтоксигруппа.

Этерифицированная до сложного эфира гидроксигруппа предпочтительно представляет собой (низш.)алканоилокси-, бензоилокси-, (низш.)алкоксикарбонилоксигруппу, такую как трет-бутоксикарбонилоксигруппа, или фенил(низш.)алкоксикарбонилоксигруппу, такую как бензилоксикарбонилоксигруппа.

Этерифицированная до сложного эфира карбоксигруппа предпочтительно представляет собой (низш.)алкоксикарбонил, такой как трет-бутоксикарбонил, изопропоксикарбонил, метоксикарбонил или этоксикарбонил, фенил (низш.)алкоксикарбонил или фенилоксикарбонил.

Алканоил представляет собой, прежде всего, алкилкарбонил, предпочтительно (низш.)алканоил, например ацетил.

N-моно- или N,N-дизамещенный карбамоил предпочтительно замещен на концевом атоме азота одним или двумя заместителями, выбранными из ряда, включающего (низш.)алкил, фенил(низш.)алкил и гидрокси(низш.)алкил.

Алкилфенилтиогруппа предпочтительно представляет собой (низш.)алкил-фенилтиогруппу.

Алкилфенилсульфонил предпочтительно представляет собой (низш.)алкил-фенилсульфонил.

Алкилфенилсульфинил предпочтительно представляет собой (низш.)алкил-фенилсульфинил.

Гетероциклил предпочтительно обозначает 5- или 6-членную гетероциклическую систему с 1 или 2 гетероатомами, выбранными из группы, включающей азот, кислород и серу, которая может быть ненасыщенной или полностью или частично насыщенной и может быть незамещена или замещена предпочтительно (низш.)алкилом, таким как метил; предпочтительным является радикал, выбранный из ряда, включающего 2-метилпиримидин-4-ил, оксазол-5-ил, 2-метил-1,3-диоксолан-2-ил, 1H-пиразол-3-ил и 1-метилпиразол-3-ил.

Арил в форме фенила, который замещен (низш.)алкилендиоксигруппой, связанной с двумя соседними атомами углерода, такой как метилендиоксигруппа, предпочтительно представляет собой 3,4-метилендиоксифенил.

Гетероарил обозначает гетероциклический фрагмент, который является ненасыщенным в кольце, которое связывает гетероарильный радикал с остальной частью молекулы формулы I, и предпочтительно является моно-, би- или трициклическим, предпочтительно моно- или бициклическим; причем по меньшей мере в связывающем кольце, но необязательно также и в любом неприсоединенном кольце, каждый один или несколько, предпочтительно 1-4, наиболее предпочтительно 3 или 4, атома углерода замещены гетероатомом, выбранным из группы, включающей азот, кислород и серу; причем связывающее кольцо предпочтительно имеет 5-12, более предпочтительно 5-7, кольцевых атомов; и может быть незамещенным или быть замещено одним или несколькими, предпочтительно 1 или 2, заместителями, выбранными из группы, указанной выше в качестве заместителей арила, наиболее предпочтительно (низш.)алкилом, таким как метил; предпочтительно гетероарил выбирают из ряда, включающего тиенил, фурил, пиранил, тиантренил, изобензофуранил, бензофуранил, хроменил, 2Н-пирролил, пирролил, замещенный (низш.)алкилом имидазолил, бензимидазолил, пиразолил, тиазолил, изотиазолил, оксазолил, изоксазолил, пиридил, пиразинил, пиримидинил, пиридазинил, индолизинил, изоиндолил, 3Н-индолил, индолил, индазолил, триазолил, тетразолил, пуринил, 4Н-хинолизинил, изохинолил, хинолил, фталазинил, нафтиридинил, хиноксалил, хиназолинил, циннолинил, птеридинил, карбозолил, фенантридил, акридинил, перимидинил, фенантролинил и фуразанил; более предпочтительно выбирают из ряда, включающего триазолил, предпочтительно 1,2,4-триазолил, 1,2,3-триазолил или 1,3,4-триазолил, пиридил, предпочтительно 2-, 3- или 4-пиридил, индолил, предпочтительно 3-индолил, (низш.)алкилтиазолил, предпочтительно 2-(4-метилтиазолил), пирролил, предпочтительно 1-пирролил, (низш.)алкилимидазолил, предпочтительно 4-(1-метилимидазолил), 4-(2-метилимидазолил) или 4-(5-метилимидазолил), бензимидазолил, такой как 1-бензимидазолил, или тетразолил, такой как 5-(1,2,3,4-тетразолил).

Моно- или бициклическая гетероарильная группа, включающая один или несколько кольцевых атомов азота, предпочтительно представляет собой гетероарильную группу, как она определена выше для гетероарила, при условии, что предпочтительно по меньшей мере один атом азота присутствует в виде кольцевого гетероатома в связывающем кольце (что означает кольцо, от которого начинается связь, соединяющая гетероарильный фрагмент с остальной частью молекулы), и при условии, что R₂ не может обозначать 2-фталимидил, и в случае, когда Y обозначает SO₂, не может обозначать 2,1,3-бензотиадиазол-4-ил. Предпочтительно гетероарил обозначает имидазолил, особенно предпочтительно имидазол-4-ил, хинолил, предпочтительно 3-, 4-, 5-хинолил, нафтиридинил, предпочтительно 3-(1,8-нафтиридинил) или 4-(1,8-нафтиридинил) или особенно предпочтительно фрагмент формул Ib или Ic

где

r равно 0-2;

А, В, D и Е независимо друг от друга обозначают N или СН, при условии, что не более двух из этих радикалов обозначают N; предпочтительно каждый из А, В, D и Е обозначает СН; и Q обозначает (низш.)алкил, предпочтительно метил, гидрокси-, (низш.)алкокси-, предпочтительно метоксигруппу, (низш.)тиоалкил, предпочтительно метилтиогруппу, или галоген, предпочтительно фтор, хлор или бром.

Особенно предпочтительно R₂ обозначает 3-пиридил, 4-пиридил, 4-хинолинил или 5-хинолинил. Наиболее предпочтительно R₂ обозначает 4-пиридил.

Заместитель, отличный от водорода, предпочтительно выбирают из ряда, включающего амино-, моно- или дизамещенную аминогруппу, галоген, алкил, замещенный алкил, гидрокси-, этерифицированную до простого или сложного эфира гидрокси-, нитро-, циано-, карбокси-, этерифицированную до сложного эфира карбоксигруппу, алканоил, карбамоил, N-моно- или N,N-дизамещенный карбамоил, амидино-, гуанидино-, меркапто-, сульфо-, (низш.)алкилтиогруппу, фенилтио-, фенил(низш.)алкилтио-, алкилфенилтиогруппу, (низш.)алкилсульфинил, фенилсульфинил, фенил (низш.)алкилсульфинил, алкилфенилсульфинил, (низш.)алкансульфонил, фенилсульфонил, фенил (низш.)алкилсульфонил, алкилфенилсульфонил, (низш.)алкенил, (низш.)алканоил, галоген (низш.)алкил-меркаптогруппу, галоген (низш.)алкилсульфонил, в частности такой как трифторметансульфонил, и гетероциклил. Два заместителя, отличные от водорода, присоединенные к соседним кольцевым атомам углерода, также могут обозначать (низш.)алкилендиоксигруппу, такую как метилендиокси-, этилендиоксигруппа. Предпочтительно отличный от водорода заместитель обозначает (низш.)алкил или галоген, предпочтительно метил, хлор или фтор.

Предпочтительно R₇ и R₈ обозначают водород, и каждый R₃, R₄, R₅ и R₆ независимо друг от друга обозначает водород, хлор или фтор.

Соли предпочтительно представляют собой фармацевтически приемлемые соли соединений формулы I.

Такие соли, предпочтительно фармацевтически приемлемые соли, получают, например, в виде кислотно-аддитивных солей, предпочтительно солей соединений формулы I с основным атомом азота с органическими или неорганическими кислотами. Приемлемыми неорганическими кислотами являются, например, галогенводородные кислоты, такие как соляная кислота, серная кислота или фосфорная кислота. Приемлемыми органическими кислотами являются, например, карбоновые, фосфоновые, сульфоновые или сульфаминовые кислоты, например уксусная кислота, пропионовая кислота, октановая кислота, декановая кислота, додекановая кислота, гликолевая кислота, молочная кислота, фумаровая кислота, янтарная кислота, адипиновая кислота, пимелиновая кислота, субериновая кислота, азелаиновая кислота, яблочная кислота, винная кислота, лимонная кислота, аминокислоты, такие как глутаминовая кислота или аспарагиновая кислота, малеиновая кислота, гидроксималеиновая кислота, метилмалеиновая кислота, циклогексанкарбоновая кислота, адамантанкарбоновая кислота, бензойная кислота, салициловая кислота, 4-аминосалициловая кислота, фталевая кислота, фенилуксусная кислота, миндальная кислота, коричная кислота, метан- или этансульфоновая кислота, 2-гидроксиэтансульфоновая кислота, этан-1,2-дисульфоновая кислота, бензолсульфоновая кислота, 2-нафталинсульфоновая кислота, 1,5-нафталиндисульфоновая кислота, 2-, 3- или 4-метилбензолсульфоновая кислота, метилсерная кислота, этилсерная кислота, додецилсерная кислота, N-циклогексилсульфаминовая кислота, N-метил-, N-этил- или N-пропилсульфаминовая кислота или другие органические протонные кислоты, такие как аскорбиновая кислота.

В присутствии отрицательно заряженных радикалов, таких как карбокси- или сульфогруппа, могут быть также получены соли с основаниями, например соли металлов или аммония, такие как соли щелочного металла или щелочноземельного металла, например соли натрия, калия, магния или кальция, или аммонийные соли на основе аммиака или пригодных органических аминов, таких как третичные моноамины, например триэтиламин или три(2-гидроксиэтил)амин, или гетероциклических оснований, например N-этилпиперидина или N, N'-диметилпиперазина.

Если в одной и той же молекуле присутствует основная группа и кислотная группа, соединение формулы I также может образовывать внутренние соли.

Для целей выделения или очистки также можно использовать фармацевтически неприемлемые соли, например пикраты или перхлораты. Для терапевтического применения можно использовать только терапевтически приемлемые соли или свободные соединения (при необходимости в форме фармацевтических композиций), и они являются предпочтительными.

В связи с близким сходством между новыми соединениями в свободной форме и в форме их солей, включая те соли, которые могут использоваться в качестве промежуточных продуктов, например, при очистке или идентификации новых соединений, следует понимать, что любая ссылка на свободное соединение, приведенная выше или ниже в настоящем описании, относится также к соответствующим солям, когда это является необходимым и целесообразным.

Соединения формулы I и их N-оксиды обладают ценными фармакологическими свойствами, как это указано выше и ниже в настоящем описании.

Эффективность соединений по изобретению в качестве ингибиторов активности тирозинкиназного рецептора VEGF может быть продемонстрирована следующим образом.

Тест по определению активности в отношении тирозинкиназного рецептора VEGF. Тест проводят с использованием тирозинкиназного рецептора VEGF (Flt-1). Более подробно метод состоит в следующем: 30 мкл раствора киназы (10 нг киназного домена Flt-1, Shibuya и др., Oncogen 5, 519-524 [1990]) в 20 мМ Трис•HCl, рН 7,5, 3 мМ дихлорида марганца (MnCl₂), 3 мМ хлорида магния (MgCl₂), 10 мкМ ванадата натрия, 0,25 мг/мл полиэтиленгликоля (ПЭГ) 20000, 1 мМ дитиотреитола и 30 мкг/мл поли(Glu, Tyr), 4:1 (фирма Sigma, Букс, Швейцария), 8 мкМ [³³P]-АТФ (0,2 мкКи), 1% диметилсульфоксида и от 0 до 100 мкМ подлежащего тестированию соединения инкубируют вместе в течение 10 мин при комнатной температуре. Затем реакцию прекращают, добавляя 10 мкл 0,25М этилендиаминотетраацетата (ЭДТА), рН 7. С помощью многоканального диспенсера (фирма LAB SYSTEMS, США) вносят аликвоты по 20 мкл на мембрану типа Immobilon P из ПВДФ (поливинилдифторид) (фирма Millipore, США), которая включает микротитрационное фильтрационное устройство типа Millipore, и присоединяют к вакуумной установке. После полного удаления жидкости мембрану последовательно промывают 4 раза в бане, содержащей 0,5%-ную фосфорную кислоту (Н₃РО₄), и один раз промывают этанолом, инкубируют каждый раз в течение 10 мин при встряхивании, затем помещают в устройство типа Hewlett Packard TopCount Manifold и измеряют радиоактивность после добавления 10 мкл Microscint^® (сцинтилляционная жидкость для подсчета β-излучения). Значения IC₅₀ определяют с помощью линейного регрессионного анализа процентов ингибирования при использовании трех концентраций каждого соединения (как правило, 0,01, 0,1 и 1 мкмоль). Значения IC₅₀, которые удалось определить для соединений формулы I, находятся в диапазоне от 0,01 до 100 мкМ, предпочтительно в диапазоне от 0,01 до 50 мкМ.

Противоопухолевая активность соединений по изобретению может быть продемонстрирована в опытах in vivo следующим образом.

Активность in vivo с использованием в качестве модели бестимусных мышей, подвергнутых ксенотрансплантации: самок бестимусных мышей линии BALB/c (возрастом 8-12 недель), Novartis Animal Farm, Sissein, Швейцария) выдерживают в стерильных условиях, давая им воду и корм ad libitum (без ограничения). Опухоли индуцируют у мышей либо путем подкожной инъекции опухолевых клеток (например, линия клеток карциномы предстательной железы Du 145 (регистрационный номер АТСС НТВ 81; см. Cancer Research 37. 4049-4058 (1978)), или путем имплантации фрагментов опухоли (приблизительно 25 мг) подкожно в левый бок животных с помощью троакар-иглы 13-го размера под анестезией с использованием Forene^® (фирма Abbott, Швейцария). Обработку тестируемым соединением начинают тогда, когда средний объем опухоли достигает 100 мм³. Рост опухоли оценивают два-три раза в неделю и через 24 ч после последней обработки, определяя длину в двух перпендикулярных направлениях. Объемы опухоли рассчитывают согласно опубликованным методам (см. Evans и др., Brit. J. Cancer 45. 466-468 [1982]). Противоопухолевую активность определяют по среднему увеличению объема опухолей у обработанных животных, деленному на среднее увеличение объема опухолей у необработанных животных (контроль), и после умножения на 100 выражают в виде Т/С %. Уменьшение опухолей (данное в %) определяют как отношение наименьшего среднего объема опухоли к среднему объему опухоли в начале обработки. Тестируемое соединение вводят ежедневно с помощью желудочного зонда.

В альтернативном варианте аналогичным образом также могут применяться другие линии клеток, например:

- линия клеток аденокарциномы молочной железы MCF-7 (АТСС № НТВ 22; см. также J. Natl. Cancer Inst. (Bethesda) 51, 1409-1416 [1973]);

- линия клеток аденокарциномы молочной железы MDA-MB 468 (АТСС № НТВ 132; см. также In Vitro 14, 911-915 [1978]);

- линия клеток аденокарциномы молочной железы MDA-MB 231 (АТСС № НТВ 26; см. также J. Natl. Cancer Inst. (Bethesda) 53, 661-674 [1974]);

- линия клеток карциномы ободочной кишки Colo 205 (АТСС № CCL 222; см. также Cancer Res.38, 1345-1355 [1978]);

- линия клеток карциномы ободочной кишки НСТ 116 (АТСС № CCL 247; см. также Cancer Res.41, 1751-1756 [1981]);

- линия клеток карциномы предстательной железы DU145 (АТСС № НТВ 81; см. также Cancer Res.31, 4049-4058 [1978]); и

- линия клеток карциномы предстательной железы РС-3 (АТСС № CRL 1435; см. также Cancer Res.40, 524-534 [1980]).

Ингибирование индуцируемого VEGF автофосфорилирования KDR-рецептора может быть подтверждено дополнительно в экспериментах in vitro на клетках: трансфектированные СНО-клетки, которые непрерывно экспрессируют человеческий рецептор VEGF (KDR), высевают в полную культуральную среду (дополненную 10% фетальной телячьей сыворотки (ФТС) в 6-луночные планшеты для культуры клеток и инкубируют при 37°С в атмосфере 5% СО₂ до достижения примерно 80%-ной конфлюэнтности. Затем подлежащие тестированию соединения разбавляют культуральной средой (без ФТС, но с добавлением 0,1% бычьего сывороточного альбумина) и добавляют к клеткам. (Контрольные варианты включают среду без тестируемых соединений). После инкубации в течение 2 ч при 37°С добавляют рекомбинантный VEGF; конечная концентрация VEGF составляет 20 нг/мл. После дополнительной пятиминутной инкубации при 37°С клетки дважды промывают охлажденным на льду ЗФР (забуференный фосфатом физиологический раствор) и немедленно лизируют, используя по 100 мкл буфера для лизиса на лунку. Затем лизаты центрифугируют для удаления ядер клеток и концентрации протеина супернатантов определяют с помощью имеющего в продаже набора для анализа протеинов (фирма BIORAD). Затем лизаты либо сразу же используют для экспериментов, либо при необходимости хранят при -20°С.

Для оценки фосфорилирования рецептора KDR осуществляют твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA) с использованием иммуносэндвича следующим образом: моноклональное антитело к KDR (например, МАт 1495.12.14, полученное от Н. Towbin) иммобилизуют на черных планшетах для ELISA (типа OptiPlate™ HTRF-96 фирма Packard). Затем планшеты промывают и оставшиеся свободные протеинсвязывающие сайты насыщают с помощью 1% БСА в ЗФР. Затем в этих планшетах клеточные лизаты (20 мкг протеина на лунку) инкубируют в течение ночи при 4°С с антителом к фосфотирозину, сшитому с щелочной фосфатазой (АФ) (РY20:АФ фирмы Transduction Laboratories). Планшеты вновь промывают и затем выявляют связывание антитела к фосфотирозину с улавливающим фосфорилированным рецептором с использованием люминисцентного АФ-субстрата (типа CDP-Star, готовый к применению, с помощью Emerald II; фирма TROPIX). Люминесценцию оценивают с помощью сцинтилляционного счетчика типа Packard Top Count Microplate Scintillation Counter (Top Count). Разница между сигналом положительного контроля (стимулированного VEGF) и сигналом отрицательного контроля (не стимулированного VEGF) соответствует индуцируемому VEGF фосфорилированию KDR-рецептора (=100%). Активность тестируемых соединений рассчитывают как ингибирование (в %) индуцируемого VEGF фосфорилирования KDR-рецептора, при этом концентрацию вещества, которая индуцирует половину от максимального ингибирования, обозначают как ED₅₀ (доза, вызывающая 50%-ное ингибирование). Значения ED₅₀ для соединений формулы I предпочтительно находятся в диапазоне от 0,001 мкМ до 6 мкМ, предпочтительно в диапазоне от 0,005 до 0,5 мкМ.

Соединение формулы I или его N-оксид также ингибирует в различной степени другие тирозинкиназы, участвующие в трансдукции сигнала, которые опосредуются трофическими факторами, например AbI-киназу, киназу из Src-семейства, предпочтительно c-Src-киназу, Lck и Fyn; а также киназы из EGF-семейства, например с-еrbВ2-киназу (HER-2), с-еrbВ3-киназу, с-еrbВ4-киназу; киназный рецептор инсулинподобного фактора роста (IGF-1-киназа), прежде всего представители семейства тирозинкиназных рецепторов PDGF, такие как киназный рецептор PDGF, киназный рецептор CSF-1, киназный рецептор Kit и киназный рецептор VEGF; а также серин/треонинкиназы, все они играют роль в регуляции роста и трансформации в клетках млекопитающих, включая клетки человека.

Ингибирование с-еrbВ2-тирозинкиназы (HER-2) может быть оценено, например, аналогично тому, как определяют ингибирование протеинкиназы EGF-R (см. Hause и др., Europ. J. Biochem. 140, 363-367 [1984]). Выделение с-erbB2-киназы и определение ее активности может быть проведено с использованием хорошо известных методов (см. Т. Akiyama и др., Science 232, 1644 [1986]).

На основе этих исследований установлено, что соединение формулы I по изобретению обладает терапевтической эффективностью, в частности, в отношении заболеваний, зависящих от протеинкиназы, прежде всего пролиферативных заболеваний.

Возможность применения соединения формулы I для лечения артрита как примера воспалительного ревматического или ревматоидного заболевания может быть продемонстрирована следующим образом.

Для определения антиартрической активности соединений формулы I или их солей используют хорошо известную модель вызванного адъювантом артрита у крыс (Pearson, Proc. Soc. Exp. Biol., 91, 95-101 [1956]). Вызванный адъювантом артрит может лечиться с помощью двух различных схем дозирования: либо (I), начиная с момента иммунизации адъювантом (профилактическая обработка): либо (II), начиная с 15 дня, когда артрическая реакция уже проявляется (терапевтическая обработка). Предпочтительно применяют терапевтическую схему дозирования. Для сравнения отдельную группу обрабатывают ингибитором циклооксигеназы-2, таким как 5-бром-2-(4-фторфенил)-3-[4-(метилсульфонил)фенил]тиофен или диклофенак.

Более подробно метод состоит в следующем: самцам крыс линии Wistar (5 животных весом примерно 200 г на группу, поставляемых фирмой Credo Франция) вводят в.к. (внутрикожно) в основание хвоста 0,1 мл минерального масла, содержащего 0,6 мг лиофилизированной убитой тепловой обработкой Mycobacterium tuberculosis. Крыс обрабатывают тестируемым соединением (3, 10 или 30 мг/кг перорально, один раз в день) или носителем (водой), осуществляя обработку с 15 по 22 день (терапевтическая схема дозирования). В конце эксперимента припухлость суставов лап оценивают с помощью микроциркуля. Ингибирование припухлости лап (в %) рассчитывают путем сравнения с припухлостью лап страдающих артритом обработанных носителем животных (ингибирование 0%) и нормальных, обработанных носителем животных (ингибирование 100%).

Активность соединений формулы I в качестве болеутоляющих средств может быть продемонстрирована с помощью следующей модели ноцицепции (боли). Согласно этой модели гипералгезию, вызванную инъекцией в подошву суспензии дрожжей, оценивают, воздействуя на лапу повышенным давлением до тех пор, пока животные не начинают подавать сигналы голосом или отдергивать лапу от подающей давление подушки. Эта модель позволяет выявлять ингибиторы СОХ, поэтому в качестве контроля в ней используют диклофенак в концентрации 3 мг/кг.

Метод: Определяют фоновое давление, необходимое для того, чтобы вызвать сигналы голосом или отдергивание лапы, для самцов крыс Sprague Dawley (весом примерно 180 г, поставляемых фирмой Iffa Credo, Франция) (за 2 ч до обработки), а затем осуществ